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生物活性玻璃表面修饰的研究 生物活性玻璃（bg）是一种性能良好的硬组织修复材料。它具有良好的生物适应性、生物活性和生物矿化特性，以及良好的力学、生物学性能和骨骼传导性。通常用于骨骼和牙齿科的修复治疗。但如果作为单一的硬组织修复材料,其脆性较大,柔韧性不足,不易依需要加工成特定形状或者多孔结构,使其在目前发展较快的组织工程支架材料上的应用受到限制;而对于天然硬组织如骨组织来说,其组成本身可视为由有机物和无机物组成的复合材料。因此不论从改进BG的脆性、成型性方面,还是从仿生的角度来看,将BG与有机高分子进行复合可以克服单一材料的缺点,获得较好的韧性、强度、加工性等。但无机相的BG与高分子复合时二者相容性较差、难以分散均匀,影响到复合材料的界面性能。硅烷偶联剂能显著改善无机粉体与高分子材料的界面相容性。本文中利用BG表面丰富的活泼硅羟基,将氨丙基三乙氧基硅烷[APTES,NH2(CH2)3Si(OC2H5)3]键连到BG表面,以期改善与高分子相的亲和性。前期研究结果表明,将这种经修饰的BG与壳聚糖-明胶复合后,所得到的复合支架的力学性能高于未经修饰的复合支架,表明BG和高分子相间的亲和性得到改善,提高了复合支架的界面性能,本研究中对修饰前后BG的结构进行了表征。而作为组织修复用生物医用材料,必须具有良好的细胞相容性,本文中对修饰后BG的细胞相容性进行了初步研究。 1 试剂与仪器 正硅酸乙酯(天津化学试剂一厂),化学纯;磷酸三乙酯(中国五联化工厂),分析纯;四水合硝酸钙(广州化学试剂厂),分析纯;盐酸(广东省东红化学厂),分析纯;氨丙基三乙氧基硅烷(APTES,Sigma公司),纯度99%;58S BG(采用溶胶-凝胶法实验室自制);正己烷(天津化学试剂一厂),分析纯;高糖DMEM(Gibco公司);PBS(广州威佳公司)。 1.1 干凝胶的制备 室温下在烧杯中加入去离子水和1 mol/L盐酸,磁力搅拌5 min,随后边搅拌边加入正硅酸乙酯,搅拌30 min,溶液转为清澈透明;缓慢滴加磷酸三乙酯,继续强力搅拌20 min,最后缓慢加入硝酸钙,充分搅拌60 min,即得到溶胶液。将溶胶液室温下静置陈化形成均匀透明的块状凝胶。凝胶在70℃干燥72 h,180℃干燥48 h。将得到的干凝胶置于坩锅中,放入快速升温箱式电炉中程序升温进行烧结。自然冷却后,在玛瑙研钵中研磨,得白色BG粉末。 1.2 aptes溶液 称取一定量58S BG粉体,置于三口烧瓶中,加入5 vol%的APTES的正己烷溶液,搅拌,氮气保护,70℃水浴加热10 h。反应完成后,取出BG粉体,先后用正己烷、乙醇、去离子水反复清洗,离心分离,真空干燥箱中干燥至恒重备用。 1.3 mtt法检测细胞增殖 将BG采用压片机压成直径约1 cm、厚度约1 mm的圆片,60Co辐射消毒;将修饰前后的BG圆片在DMEM培养液中浸泡7天;浸泡后的材料置于12孔培养板中,加入事先消化好的MC-3T3细胞悬液(密度2×104cell/mL),于37℃、95%湿度、5%CO2条件下培养箱中培养,隔2天换液1次,于培养第1、3、5、7天在预先设定的培养孔中,通过MTT法(四唑盐比色法)对细胞增殖进行测定。于培养第5天时,取出BG圆片,PBS冲洗3遍,用2.5%戊二醛于4℃固定1 h;将固定好的材料用PBS冲洗干净,梯度乙醇脱水,乙酸异丙酯置换。临界点干燥,表面喷金后进行SEM观察。 1.4 热重分析和粒度分布 采用美国Nicolet公司的NEXUS傅里叶变换红外光谱仪对修饰前后的BG进行结构表征;采用德国Netzsch公司STA449C Jupiter型同步综合热分析仪对BG进行热重分析,在氧气气氛下,以Al2O3粉体为标样,升温速率20℃/10 min;采用马尔文公司的MASTERSIZER2000激光粒度分析仪进行湿法(水作为分散剂)粉末粒度分布测试(采用超声进行分散);采用荷兰Philips 30XLFEG型扫描电子显微镜(SEM)在样品喷金后进行微观形貌观察。 2 结果与讨论 2.1 aptes的ftir分析 图1为58S BG、APTES以及经修饰后的BG的FTIR谱图。在图1曲线a未经修饰的BG谱图中,3430 cm-1附近明显的吸收峰归属于表面丰富的硅羟基以及结合水O—H的伸缩振动峰,宽峰形显示出羟基间的缔合;1640 cm-1处为BG毛细孔中和表面吸附的水引起的反对称O—H弯曲振动;850~1250 cm-1之间的宽而强的吸收峰中包含了P O伸缩振动、Si—O伸缩振动和P—O伸缩振动峰;464 cm-1处峰则由Si—O—Si键的弯曲振动引起。图1曲线b为APTES的FTIR谱图,3370 cm-1附近为端氨基的N—H伸缩振动峰;2800~2980 cm-1之间归属于饱和C—H的伸缩