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大鼠心肌缺血再灌注模型心电图变化的研究 缺血性心脏病具有高度的发病率和死亡率，在世界范围内很受欢迎。最常见的原因之一是冠状动脉粥样硬化，伴随着动脉血栓形成、痉挛和冠状动脉阻塞。心肌再灌注是缺血心脏的血流恢复。动物模型可模拟人类心肌缺血及再灌注过程,用以研究缺血预适应及后适应机制,评价抗心肌缺血及心律失常药物疗效。大鼠因冠状动脉侧支循环少,模型制作成功率高,重复性及稳定性好,费用低廉而成为制作心肌缺血再灌注模型的常用动物。冠状动脉结扎法致急性心肌缺血大鼠模型已被公认为研究缺血性心肌病的经典实验动物模型。但是文献对大鼠心肌缺血再灌注过程中心电图改变的报告不多。我们研究了23只假手术及缺血再灌注大鼠的心电图变化,现报道如下。 1 材料和方法 1.1 动物分组及处理 健康雄性SD大鼠23只,3个月龄,体质量为(250±50)g,购买自广东省实验动物中心,按电脑随机数字表法分为2组:缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)组13只,心肌缺血35 min后再灌注120 min;假手术组10只,仅穿线而未结扎冠状动脉。 1.2 razeliumchiluschluschlusc网络ct 氯化三苯基四氮唑(triphenyltetrazoliumchloride,TTC),购自美国Sigma-Aldrich公司;伊文思蓝购自美国Sigma-Aldrich公司。 1.3 图像分析设备及仪器 TKR-200C型小动物呼吸机购自江西省特力仪器厂;Pclab-3804型科研放大器购自北京Pclab设备公司;光学显像摄影装置购自日本Olympus公司;Shangping JA12002型电子天平购自上海电子天平厂;Mi Vnt图像分析软件系统购自上海光学仪器厂;HFU-21低温冰箱购自日本三菱公司;高速离心机购自德国HETTICH公司。 1.4 心肌i/r模型 大鼠称体质量后肌肉注射氯胺酮(7 mg/kg)及地西泮(70 mg/kg)进行麻醉,成功后给予气管插管机械通气,频率80~90次/min,潮气量2 m L/100 g。以针刺电极插于四肢皮下全程监测标准肢体Ⅱ导联心电图。在大鼠胸骨左侧旁约0.5 cm处纵行切开皮肤,从第3~4肋骨间钝性分离皮下组织及肌肉。剪开心包,暴露心脏。在左心耳与肺动脉圆锥间,以左冠状静脉主干为标志,用7-0号带针丝线穿刺结扎左前降支,在结扎线中埋置橡皮筋,以心电图Ⅱ导联出现ST段抬高及T波升高,同时肉眼观察结扎区域变苍白等心肌缺血表现为结扎成功的指标。35 min后松解结扎线给予再灌注治疗,即为心肌I/R模型。假手术组即仅穿线而未结扎冠状动脉。 1.5 观测指标和测定方法 1.5.1 心电图评估 在检测肢体Ⅱ导联心电图时,检测心率、P波、QRS波及T波变化,记录缺血及再灌注各种心律失常的类型及发生时间。 1.5.2 肝脏蓝染区 I/R组再灌注120 min后,重新结扎左前降支,同时于鼠尾静脉弹丸式注入1%伊文氏蓝1 m L,30 s后取出大鼠心脏,去除右心室,左心室蓝染区为非缺血区,非蓝染区为缺血区。将心脏放入零下20℃冰箱0.5 h,取出后使房室沟平行并将左心室切成厚度约为2 mm的薄片,置入37℃的0.1%TTC磷酸缓冲液(p H=7.4)中孵育15 min后取出,坏死心肌呈白色,未坏死心肌呈红色,置入4%甲醛中固定24 h,实体照相后用图像分析仪计算每只大鼠的左心室总截面积及梗死面积。 1.6 统计分析 采用SPSS 13.0软件处理,所有数据以表示,组内比较进行方差分析,组间比较采用独立样本t检验。P0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 死亡原因及死亡标准 23只大鼠有3只在手术中死亡,均属于I/R组。死亡原因为心室颤动及大出血。余下20只大鼠成功制作模型:假手术组10只,I/R组10只。 2.2 两组之间的心电图变化 2.2.1 基础波形:基础波形还是t波 缺血期I/R组10只大鼠结扎左前降支后,出现P波、R波和T波增高,与基础波形明显不同;再灌注期10只大鼠随着再灌注时间延长,P波、R波、T波逐渐回落,再灌注60 min左右相对稳定,与基础心电图比较无明显差异,详见表1。 2.2.2 标准导联st段 与假手术组(图1)比较,造模后I/R组大鼠在结扎血管15 min内(缺血期)标准Ⅱ导联ST段出现升高,QRS波形和T波波形增宽,6只大鼠R波与T波互相融合成一单相曲线,缺血15 min时图形相对稳定(图2)。再灌注期随着再灌注时间延长,I/R组ST段逐渐回落,再灌注1 h左右相对稳定(图3)。 2.2.3 心率相对稳定 缺血期结扎前降支后I/R组大鼠心率逐渐减慢,缺血15 min后相对稳定。再灌注期10只大鼠的心率较缺血时略有回升,再灌注1 h左右相对稳定;假手术组大鼠在过线后15