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大鼠心肌梗死模型的优化和改良 心血管疾病是一种严重的心血管疾病，是老年人死亡的主要原因之一。心肌梗死动物模型是研究梗死性心脏病病理机制和相关治疗药物疗效评价的一个重要手段, 而心肌梗死面积 ( myocardial infarctsize, MIS) 的大小是评价梗死程度的关键指标之一［1］。采用手术结扎冠状动脉降支造成大鼠急性心肌梗死是目前公认的心肌梗死经典动物模型［2］, 但由于模型制作过程中受如麻醉、插气管、保温、手术方法和术后护理等各个环节影响以及梗死心肌自身的病理生理特点［3］, 存在模型制作和术后动物死亡率高, 心肌梗死面积个体差异大等问题。本研究在以往的工作基础上, 对结扎大鼠左冠状动脉前降支建立急性心肌梗死模型的制作过程 ( 包括麻醉、插气管、手术操作、术后护理以及心肌染色等环节) 进行优化和改进, 并观察不同的麻醉方法和术后时间对心肌梗死程度的影响, 用不同的染色方式进行心肌染色, 探讨其合理的评价方法。 1 实验动物及环境 SPF级雄性SD大鼠80 只, 体重220 g ~ 250 g, 中国科学院上海实验动物中心/上海斯莱克实验动物有限公司[生产许可证: SCXK ( 沪) 2012-0002];饲养在浙江中医药大学动物实验研究中心屏障系统[SYXK ( 浙) 2012-0002], 环境温度: ( 20 ± 2) ℃, 相对湿度: 50% ~ 60% , 光照: ( 150 ~ 200) LX, 12 h /12 h明暗交替, 噪间 50 db; 并在实验过程中按实验动物使用的3R原则给予人道主义关怀。 1.2 药物、试剂和仪器 戊巴比妥钠: 25 g/瓶, 含量≥ 99. 0% , 批号:W 德国进口分装, 上海西唐科技有限公司; 水合氯醛: 分析纯250g/瓶, 批号: 上海化学试剂采购供应五联化工厂; 异氟烷 ( isoflurane) :100 m L / 瓶, 产品批号: 120203, 鲁南贝特制药有限公司; 氯化三苯基四氮唑 ( 2, 3, 5-triphenyl tetrazoliumchloride, TTC) : 10 g / 瓶, 批号: 中国华东师范大学化工厂; 伊文思蓝 ( Evans blue) : 10 g/瓶, 批号: 国药集团化学试剂有限公司; 琼脂糖G-10 ( regular agarose G-10) , 100 g / 瓶, 批号: 111935, 法国Biowest公司; 青霉素钠: 80 万U/瓶, 批号:120422, 广州白云山天心制药股份有限公司; 氯化钾:分析纯AR, 500 g/瓶, 批号: 国药集团化学试剂有限公司。 1.3 实验仪器和设备 Summit小动物麻醉呼吸机, 美国Summit公司;AL204-电子分析天平, 瑞士Mettler公司; Gaymar恒温手术台, 美国Hallowel L公司; Model 994 超低温冰箱, Thermo Scientific公司; DK-600 型电热恒温水槽, 上海精密实验设备有限公司; HP-Laser JetM1213nf MFP扫描仪, 美国惠普公司。手术器械包 ( 手术剪、头和直头止血钳、弯形镊子、显微持针器、开胸器、手术线、干棉花、酒精棉、纱布、头皮针、注射器、三通管、棉线) , 6-0 无菌医用非吸收性缝合线无损伤缝合针, 杭州富阳医用缝合针线厂。 1.4 术后大鼠麻醉前处理 1. 4. 1 手术方法: 雄性SD大鼠麻醉、手术区剃毛后, 固定在45° ~ 60°斜台, 将上切牙固定在鼠板边缘, 光源照亮颈喉部有利于显露声门, 行无创经口直视气管插管, 口腔镜有雾气检查插管成功; 待大鼠呼吸平稳后转移至恒温手术台 ( 36 ~ 38) ℃, 仰卧位固定在鼠板上, 手术区擦聚维酮碘消毒, 连接呼吸机, 呼吸比2: 1, 潮气量30 m L/kg, 呼吸频率60 ~65 次/ min, 大头针穿刺左右前肢皮下, 连接心电图机测肢体Ⅱ导联心电图。大鼠呼吸平稳后, 沿左胸骨2 mm处切开皮肤约 ( 2 ~ 2. 5) cm, 第三、四肋骨间隙钝性分离肋间肌, 开胸器撑开肋间隙扩大手术视野。小心地撕开心包膜暴露心脏, 消毒棉轻轻固定好, 于左心耳下缘2 mm ~ 3 mm处用6-0 无创缝合针结扎左冠状动脉前降支, 进针深度约2 mm, 结扎跨度 ( 2 ~ 3) mm, 做两次外科手术结扎打结。结扎后肉眼可见结扎局部和左心室前壁呈灰白至紫绀, 或Ⅱ导联心电图S-T段抬高并持续15 min以上则为心肌梗死结扎成功标志。结扎后逐层缝合胸腔, 并预留留置针以防止发生气胸, 抽胸腔负压 ( 抽取时注