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丹参提取物中丹参素和原儿茶醛在体肠吸收动力学研究 丹参是嘴唇科植物的丹参。它含有丹参素、原儿茶素、a、原儿茶素、酸、胺和其他化合物。具有微循环、抗凝、抗高血压、抗高血压、抗血郁等功效。它通常用于治疗冠状动脉粥样硬化和心绞痛。口服给药时,肠道是药物吸收的主要部位,因此研究药物在肠道的吸收情况对于明确药物在体内的作用途径及吸收机制具有重要意义。目前关于丹参中活性成分的单体在肠道吸收情况的研究已有报道,但研究这些活性成分在化学成分复杂的提取物中的肠吸收机制的较少,而这种研究更符合药物真实的吸收情况。本实验采用大鼠在体单向灌流模型,通过稳定性预试验,选取丹参素、原儿茶醛作为指标成分,研究其在大鼠肠吸收情况,以期为丹参新制剂的研发提供生物药剂学依据。 1 药材、药品与试剂 LEAD—1型电子蠕动泵(保定兰格恒流泵有限公司);Agilent 1100型高效液相色谱仪、二极管阵列检测器(DAD)(美国惠普公司);数显恒温水浴锅(国华电器有限公司);AL104分析天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)。 丹参素对照品(批号110855-200507)、原儿茶醛对照品(批号110810-200506),中国药品生物制品检定所;丹参药材购于安徽亳州中正中药饮片有限公司,经江西中医学院龚千峰教授鉴定为正品。 Kreb-Ringer’s营养液(K氏液,每1 L含Na Cl7.8 g、KCl 0.35 g、Ca Cl20.37 g、Na H2PO40.32 g、Na HCO31.37 g、Mg Cl20.02 g、葡萄糖1.4 g),生理盐水(批开开援生制药股份有限公司),戊巴比妥钠(批号020919,北京化学试剂公司)。 雄性SD大鼠,体质量(210±20)g,江西中医学院清洁级实验动物中心提供,合格证号:SCXXK(赣)2005-0001。 2 方法和结果 2.1 乙醇的回收 取丹参药材约100 g,加水500 m L,煎煮2次(1.5、1 h),合并煎液,滤过,滤液减压浓缩至含生药1.3 g/m L,加乙醇使其体积分数为70%,冷藏(4℃)24 h,滤过,减压回收乙醇,浓缩至含生药2.5g/m L,再加乙醇,使乙醇体积分数达85%,冷藏24h,滤过,减压回收乙醇,加水至200 m L,冷藏24h,滤过,喷雾干燥,收集干粉备用。精密称取喷干物30 mg,置于25 m L量瓶中加水溶解,并稀释至刻度,按照“2.2”项下色谱条件,测得喷干粉中丹参素、原儿茶醛的质量分数分别为4.03%、1.06%。 2.2 丹参素和原始茶的测定 2.2.1 流动相3442 色谱柱为Hypersil ODS2C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm,大连依利特分析仪器有限公司);流动相为水-甲醇-二甲基甲酰胺-冰醋酸(90∶4∶4∶2);柱温35℃;体积流量0.8 m L/min;检测波长280 nm;进样量10μL。 2.2.2 对照品储备液的制备 精密称取丹参素对照品7.14 mg,置100 m L量瓶中,用K氏液溶解并稀释至刻度,摇匀,得71.4μg/m L丹参素对照品储备液。精密称取原儿茶醛对照品5.32 mg,置25 m L量瓶中,用K氏液溶解并稀释至刻度,摇匀,得212.8μg/m L原儿茶醛对照品储备液。 2.2.3 供试品溶液配制 收集大鼠灌流6 h后的空白肠灌流液,以此肠灌流液配制质量浓度为1.5mg/m L的丹参提取物溶液,经0.45μm微孔滤膜滤过,滤液作为供试品溶液。 2.2.4 空白肠灌流液测定 分别取丹参素对照品溶液、原儿茶醛对照品溶液、供试品溶液及空白肠灌流液依法测定,色谱图见图1。丹参素和原儿茶醛的保留时间分别为8.6 min和15.6 min,供试品溶液主峰保留时间与对照品溶液一致,空白灌流液无干扰。 2.2.5 对照品溶液的制备 分别精密量取丹参素对照品储备液和原儿茶醛对照品储备液0.25、0.5、1、2、4、8 m L置10 m L量瓶中,用K氏液稀释并定容至刻度,分别得到一系列质量浓度的丹参素和原儿茶醛对照品溶液。各进样10μL,测定,分别以峰面积积分值对对照品质量浓度进行线性回归,得回归方程:丹参素Y=725.73 X+0.666 7(R2=0.999 3),表明丹参素在1.8~57.1μg/m L线性关系良好;原儿茶醛Y=5 904.6 X-28.071(R2=0.999 9),表明原儿茶醛在5.32~170.2μg/m L线性关系良好。 2.2.6 精密度和标准曲线 分别精密称取丹参素对照品和原儿茶醛对照品适量,用空白肠灌流液稀释至不同倍数,得高、中、低(丹参素依次为7.14、14.28、29.54μg/m L;原儿茶醛依次为21.17、42.98、84.42μg/m L)3个质量浓度的对照品溶液,于