两种血蜱对莱姆病螺旋体保持能力的比较.docxVIP

两种血蜱对莱姆病螺旋体保持能力的比较 lagoon病是一种由感染水稻的自然疾病。在世界30多个国家，特别是在美国，每年报告3万多人，并被称为“第二爱得病”（b格杜埃特，1982）。我国自1986年发现海林县存在莱姆病自然疫源地以后(Aiet al.,1988),先后证实我国26个省、市、自治区存在莱姆病自然疫源地(万康林等, 1998),年发病例至少万余。蜱是莱姆病传播的主要媒介,我国只有全沟硬蜱Ixodes persulcatusSchulze由自然感染(Aiet al., 1988)、经卵传播(杜勇等,1990)和经期传播(Sunet al.,2002c)等证据证实为我国北方林区莱姆病的主要传播媒介,但此蜱仅分布于秦岭以北的山地林区,从分布区系来看,它不是我国南方林区莱姆病的传播媒介。然而我国浙江、福建、贵州、江苏等南方省区存在着莱姆病感染人群 (万康林等,1998),并且一些优势蜱种如长角血蜱Haemaphysalis longicornisNeumann、越原血蜱H.yeniToumanoff、粒形硬蜱Ixodes granulatusSupino、锐跗硬蜱I.acutitarsus(Karsch) 等多种蜱已分离或检测到莱姆病螺旋体。但这些不足以说明这些蜱种的媒介地位,还需要实验传播能力、生态学等方面的证据。蜱类每一发育期只有一次吸血,因而经期传播(即经过不同发育期后亦携带感染性病原体)率比经卵传播率高,是蜱在莱姆病传播中发挥作用的主要传播方式。感染和经期传播实验可为分析蜱种作为莱姆病媒介的可能性提供必要的依据(Laneet al.,1991)。因此,我们以我国南方林区分布且对人畜有很强的攻击性的优势蜱种中华硬蜱Ixodes sinensisTeng、越原血蜱和青海血蜱Haemaphysalis qinghaiensisTeng为基础,探讨它们传播莱姆病螺旋体的可能性,以明确它们在莱姆病传播中的地位和作用。 1 材料和方法 1.1 血蚤、莱姆病螺旋体菌株 中华硬蜱于2001年采自浙江临海和福建武夷山林区;越原血蜱于2001年采自福建武夷山林区;青海血蜱于2002年采自甘肃省甘南藏族自治州卓尼县林区。 莱姆病螺旋体菌株Borrelia gariniiCHNM4于1999年自内蒙古采集的全沟硬蜱中分离而得(孙毅等,2002a)。 昆明小鼠(简称KM 鼠) 由军事医学科学院实验动物中心提供。 1.2 方法 1.2.1 烷氧基苯磺酸盐5-四甲基氨甲基 中华硬蜱、越原血蜱和青海血蜱非感染幼蜱种群的建立参照孙毅等(2002b)的方法进行,以此幼蜱种群刺叮正常昆明小鼠蜕化形成的若蜱为非感染若蜱种群。 1.2.2 莱姆病人工床上模型的构建 人工宿主动物模型的建立参照孙毅等(2002b)的方法进行,以耳组织分离为阳性的KM鼠为人工宿主动物模型。 1.2.3 小鼠蜕化、分离和pcr检测 以中华硬蜱、越原血蜱和青海血蜱的非感染种群分别攻击阳性昆明小鼠,待饱血后,置于底部垫有湿润细沙和滤纸的试管中,然后幼蜱和若蜱分别于饱血后每隔2日采用PCR和分离的方法进行检测并观察蜱的存活与蜕皮情况,直至全部蜕化。待其全部蜕化后,分成两部分,一部分若蜱于蜕化后1个月内采用分离和PCR 方法检测,另一部分若蜱攻击正常昆明小鼠,以叮咬小鼠时间大于72 h为有效攻击,每只昆明小鼠获得有效攻击蜱数不低于5,逐日观察被叮咬小鼠的体表症状,28天后采小鼠心血致死,取少量心血进行分离培养,并解剖观察,取脾脏、膀胱、耳叶组织进行分离和PCR 检测,以同一组织块两种检测结果均呈阳性者为阳性结果。 饲养条件:(25±1)℃,RH (95±5)%,光周期12L∶12D。 1.2.4 动物组织dna提取pcr检测 将蜱纵切为两半,分别进行分离和PCR检测,以两种检测结果均呈阳性者为阳性结果。动物组织也分成两部分,一部分采用动物组织基因组DNA提取试剂盒提取DNA模板后进行PCR扩增检测,另一部分采用分离培养方法进行检测。具体的分离和PCR检测方法参照Sun等(2002c)进行。 1.2.5 罗氏病螺旋体传播的稳定性 将实验中的阳性标本,采用16S rRNA通用引物进行扩增和序列测定(孙毅等,2002a) 1.2.6 数据分析 采用SAS统计软件包进行。 2 结果与分析 2.1 中国硬蜱感染和莱姆病螺旋体可能性 2.1.1 幼象：将中国硬蜱与非感染幼象物种的唾液混合，并在一天内获得对莱姆病轴的感染，每次都可以检测到自己是否感染了莱姆病螺旋体。结果表1表明，艾滋病毒的幼象可以通过与阳性km大鼠一起获取莱姆病螺旋体。尽管检测到莱姆病螺旋体的阳性率不同，但从满血后到转化为阳性时，阳性率和分离结果可以得到很好的不同，分离和检测结果之间没有显著差异。这表明蠕虫在这一时期曾运输过生活的莱姆