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大鼠腮腺及颌下腺出血的观察与分析 在对大鼠唾液的实验和研究中，通常需要收集腮腺和下巴腺的唾液。由于大鼠唾液腺的解剖特点和导管较细小,分别收集唾液是研究者面临的难题之一。国内外许多学者进行了长期的探索,发明了插管法,吸盘法,采用组织胶将收集装置固定在腮腺或颌下腺导管开口处等。我们在实验中采用微型Lashley吸盘法收集了大鼠腮腺唾液,经口内颌下腺导管口直接插管法收集了大鼠颌下腺唾液,现报道如下。 1 材料和方法 1.1 大鼠评估lashing 大鼠,体重200～300 g,腹腔注射盐酸氯胺酮麻醉(100 mg/kg),仰卧位固定在自制手术台上,上开口器,将灯光(60 W)照向大鼠颌下腺区域的表面皮肤,用弯纹式钳撑开舌根部咽腔,用干棉球擦干咽部,光线透过咽腔表面皮肤,直视即可清楚看到声门,声带随呼吸开合运动。直视下,在大鼠吸气时迅速将塑料导管插入气管。(塑料导管外径1.78 mm、内径1.18 mm、长55 mm,前端呈斜坡形,内置一铜芯,其前端较塑料导管短约2.0 mm,以避免铜芯损伤大鼠气管)塑料导管前端可以用手术缝合线结扎固定在上颌切牙上,可以避免导管脱出。用一小棉球擦干一侧的颊黏膜,用手轻轻按摩大鼠唾液腺区,在颊黏膜腮腺导管开口处可见有一滴唾液,打开真空泵,将微型Lashley吸盘置于其上,即可将吸盘固定在颊黏膜上。颈部皮下注射0.2%毛果芸香碱(2 mg/kg),大约3 min左右,唾液开始分泌,弃掉开始几滴唾液,将唾液收集在已称重的eppendorf管内,收集15 min。在收集唾液的过程中,应保持大鼠的头部应略低一些,避免发生窒息。 1.2 颌下腺导管口内接收液pe11 h。大鼠麻醉固定后,用止血钳夹持舌尖,将舌牵出,略偏向一侧。在口底中线两侧,下中切牙舌侧约4～5 mm可见红色的颌下腺导管乳头,其腹侧为导管口,实际上肉眼看不到。将PE10塑料管(长约4 cm)一端剪成斜坡形,用镊子夹持在距插入端约2.0 mm处,拨动颌下腺导管乳头附近数次,使导管口打开,在颌下腺导管乳头的腹侧轻轻插入导管约2.0 mm。切开气管,同上颈部皮下注射0.2%毛果芸香碱刺激唾液分泌,弃掉开始几滴唾液,将唾液收集在已称重的eppendorf管内,收集时间1 h。2)颌下腺导管逆行注射毛果芸香碱,收集15 min。(1)导管的拉制:取约8 cm长PE10塑料管,双手的拇指和食指持导管的两端,将PE10拉直,但不要太紧,将PE10塑料管的中间部分在酒精灯火焰上快速通过或距火焰15 cm处将其中间短时间加热变软,在其即将融化时移开,两手慢慢向两端拉,几秒钟冷却后,从中间切开即制成两个一端更细的导管。(2)插管收集唾液:4只Wistar大鼠,麻醉、固定同上,导管的细端颌下腺导管口内插管成功后,在导管口处滴一滴组织胶密封 (502胶) 。导管的粗端连接微量注射器,通过每侧导管逆行注射0.5%毛果芸香碱25 μL,保持15 s后再移走注射器,收集15 min。 2 液流率的测定 设唾液的比重为1.0 g/cm3,以唾液重量表示其体积,计算唾液量,唾液流率(μL/min)。再分别称取腮腺和颌下腺重量,计算单位重量腺体的唾液流率μL/(g·min-1)。 3 口内颌下腺导管口运输毛果芸香碱的优点 研究唾液腺疾病的实验中,常需收集各唾液腺的唾液,以评价其功能状态。20世纪80年代末,荷兰人Vissink A首次采用微型Lashley吸盘法收集大鼠唾液。它的中心被挖空呈半球形, 中心钻一个洞与收集唾液的导管连接,吸盘周围有环形的沟槽,在沟槽底钻一个洞与真空泵连接,通过负压作用将吸盘固定在黏膜上。 我们的实验结果表明,大鼠腮腺及颌下腺唾液分泌量、唾液流率等的个体差异较大。皮下注射毛果芸香碱刺激的大鼠颌下腺唾液流率高于通过口内颌下腺导管口逆行注射毛果芸香碱刺激的唾液流率,但统计学上无明显显著性差异。我们得到的毛果芸香碱刺激的唾液流率约是Vissink A等报道值的2/3,但后者注射了4 mg/kg毛果芸香碱,因此这是毛果芸香碱剂量不同的结果。 皮下注射毛果芸香碱后,需进行气管切开,收集时间可达1小时甚至更长,但一次注射约20 min后唾液分泌缓慢,因此可以通过多次注射毛果芸香碱以便收集更多唾液。通过口内颌下腺导管口逆行注射毛果芸香碱刺激唾液分泌时,可不切开气管,但一般只能收集15 min或20 min,否则大鼠同样发生窒息而死亡。 微型Lashley吸盘法收集大鼠唾液的优点是没有导管损伤,可以同时收集双侧腮腺及颌下腺唾液,数日后可以再次收集同一只鼠的唾液。缺点是吸盘法收集双侧颌下腺唾液时,固定吸盘较困难,需要经过多次反复练习,而且不能收集单侧颌下腺唾液。此外,此方法需进行气管插管,初学者不容易掌握。直接插管法的优点是颌下腺导管插管操作简单,初学者容易掌握。缺点是