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实验动物基因工程研究进展 目前，实验动物育种的研究非常活跃，取得了良好的效果。本文仅对国内外实验动物基因工程的研究作一综述,以供读者参考。 1 小鼠基因犯罪 基因图谱就是研究基因组结构,查明染色体上基因序列。目前研究者们正在有计划地、大规模地对包括人类在内的重要生物体的全基因图谱进行测序与诠释。以期绘制出遗传连锁图、物理图、序列图和转录图等主要图谱。 由Watson发起的人类基因组计划,经许多国家科学家的努力,人类的基因序列已被基本阐明。猪的基因图谱正由英、法、德、美等10个国家18个单位进行研究;牛的基因图谱以欧洲为主,由13个国家30个单位绘制;羊的基因图谱由新西兰和北欧共同研究;家禽由英、美、荷兰、以色列等国研究。 20世纪80年代以来,小鼠基因图谱的研究取得了很大进展。在小鼠基因作图技术上有了突破性进展,如:①建立了种间回交绘图平台,由于杂交亲本之间遗传多态性程度很高,基本上任何一个基因都可在单位杂交中被定位。最常使用的亲本是C57BL/6J和mus Spertus。现可供使用的种间回交绘图平台是Jackson Laboratory Interspecific(JLIB)和European Collaborative Interspecific Backcross。②90年代以来,应用微卫星DNA技术,鉴定了数量众多的简单序列长度多态性标记(SSLP),在小鼠,目前已有总数为6 555个SSLP被定位。③在小鼠突变基因位点的定位与克隆方面,目前已有1 000多个自发或诱发的小鼠突变基因位点被定位,这些突变的表型很多与人类疾病表型相一致,因此可用小鼠突变基因鉴定人类的同源基因。④在小鼠物理图谱研究上,已构建了小鼠YAC文库并已标出9 787个标记位点,平均相邻两个标记位点之间的距离为300 kb,每个YAC克隆平均含有820 kb小鼠染色体DNA,所有YAC共覆盖了92%的小鼠基因组。⑤在小鼠转录图的研究中,现已得到40万条表达序列标签(EST)及其定位的信息,8 000个基因被定位在染色体的相应位置。⑥小鼠基因组测序,由于小鼠基因组总长度接近于人类,其测序难度也接近于人类基因组测序。作为模式生物,小鼠基因组测序被作为人类基因组计划的内容之一,预计2003年可完成全序列图。 2 dna多态性分析的应用 分子遗传标记是所有遗传分析的基础,是进行基因连锁分析、遗传图谱构建、基因定位、动物遗传育种及生物进化与分类研究中不可缺少的工具。随着限制性内切酶和DNA重组技术的出现以及分子生物学的飞速发展,遗传标记开始转向遗传物质-DNA分子。由于各种遗传信息都蕴藏在DNA分子中,生物性状间的差异在本质上是DNA分子的差异,因此DNA是最可靠的遗传标记。 近10年来,在人类基因组计划(HGT)的推动下,分子标记的研究与应用得到了迅速的发展。自1980年Botstein首先提出利用限制性内切酶酶切片段长度多态性(RFLP)构建人类遗传连锁图以来,遗传标记的数量已不再成为限制因素。用于DNA多态性分析的技术相继被提出并得到广泛应用。在以分子杂交技术为基础的RFLP 分子标记外,Jeffreys(1985)首先发现并建立了DNA指纹技术(DFP),此外还有可变数目串连重复位点(VNTRs)多态性分析、单位点小卫星多态性分析等。近年来又发展了以聚合酶链式反应(PCR)技术为基础的遗传标记方法,诸如:随机扩增多态性DNA(RAPD,Williams,Welsh,1990)、序列靶标位点(STS,Olson,1989)、微卫星DNA(亦称简单重复序列,SSR,Litt Luty,Weber May,1989)、扩增片段长度多态性(AFLP,Zabeau Marc,Vos Pieter,1992)等。上述技术被广泛应用于实验动物的遗传检测、亲子鉴定、品种(系)的遗传纯度及遗传距离的测定、重要经济性状的遗传标记、群体遗传变异分析、动物的起源与亲缘关系分析、标记辅助选择(MAS)等方面。同时,在基因制图、连锁分析、基因定位和遗传病诊断等方面也得到广泛应用。 Jeffreys(1987)采用33.6和33.15为探针检测了6个近交系小鼠及野生家鼠的DFP;Sudo等(1993)对实验兔进行了DFP分析;Woodward等(1994)用481条引物检出近交系小鼠95个RAPD多态位点,结合重组近交系分析,构建了含有76个多态标记的遗传图。目前已发现近交系大鼠微卫星位点8000多个,每一个微卫星位点都具有1~10个等位基因。我国实验动物界也广泛采用DNA标记技术开展了实验动物的遗传检测及遗传特征分析,如:董罡等(2000)用JL-02多位点探针对近交系小鼠DFP进行了分析,李瑞生等(2001)进行了DFP、SSR在近交系大鼠遗传检测的应用研究。在RAPD