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禽流感灭活疫苗安全性及ha佐剂疫苗的研制 语句是鸟类感冒的缩写，它是由a型流感病毒引起的鸟类感染的。由于血清型众多, 且各血清型间无交叉保护性, 给疫苗的研制造成了很大困难。其中大多数亚型属非致病性或致病性低, 高致病性亚型主要是含H5或H7的毒株。安全有效的疫苗免疫能减轻临床症状, 降低死亡率, 减少病毒扩散和提高群体对感染的抵抗力, 从而控制禽流感病毒的传播。 1 祖和变异现象的安全预防 一般是用甲醛灭活禽流感病毒鸡胚尿囊增殖液, 再辅以佐剂制成。该类疫苗具有良好的免疫保护性, 不会出现毒力返祖和变异现象, 安全性好, 对预防和控制禽流感起一定的作用。灭活苗的缺点是不能诱导有效的黏膜免疫, 免疫球蛋白G (Ig G) 的产生和细胞免疫应答, 因而无法有效抑制呼吸道中流感病毒的复制。国内、外禽流感灭活疫苗对同亚型的高致病性禽流感均具有良好的免疫保护作用, 可有效避免禽流感的大流行, 已经成为防控禽流感的关键。 2 采用特定多肽的病毒疫苗 最初的禽流感亚单位疫苗是从禽流感病毒中提取具有免疫原性的生物活性物质加入佐剂制成。这种亚单位疫苗安全性很好, 但是难于大量生产而且成本也高。基因工程亚单位疫苗的出现弥补了传统亚单位疫苗的不足, 将禽流感病毒膜蛋白血凝素 (HA) 基因连接到质粒载体上, 经诱导表达出具有免疫原性的蛋白, 提取出所表达的特定多肽, 加入佐剂制成基因工程亚单位疫苗。有人利用杆状病毒表达系统制作了H5、H7亚型禽流感病毒的HA佐剂疫苗, 能够对高致病性强毒的攻击产生100%保护。基因工程亚单位疫苗可大量生产, 易于纯化并能刺激机体产生足够免疫力, 且只含有能刺激机体产生保护性免疫应答所必须的免疫原成分, 不存在毒力返强、散毒和环境污染的问题, 是安全性很好的疫苗。 3 东南角基因共感染疫苗 该疫苗是将禽流感保护性抗原基因转移到载体中, 使之表达的活疫苗。痘病毒的TK基因是具有保护性的外源基因, 因此, 是比较理想的活载体。有人将禽流感病毒H5N1亚型HA基因插入载体新城疫La Sota疫苗株构建了禽流感、新城疫活载体疫苗, 可采用滴鼻、点眼、喷雾等多种接种方式进行免疫, 既能预防新城疫, 又能预防H5N1型禽流感。基因工程活载体疫苗有较强的增殖能力, 适合大规模生产, 使用成本低廉, 皮肤接种免疫应激小。同灭活疫苗相比, 重组禽痘病毒活载体疫苗免疫抗体产生早, 且可以区分免疫鸡群和野毒感染鸡群, 不影响疫情监测。 4 预防局部感染 由于具有只在25~26℃条件下传代的特征, 可以经滴鼻、点眼等途径免疫。冷适应流感弱毒疫苗只在机体上呼吸道产生无明显流感症状的不良反应, 避免肌肉注射而造成的机体应激反应和损伤。可诱导细胞免疫和体液免疫, 其能在体内复制, 使抗体维持时间长, 并能提供一定的交叉保护性, 节约成本。有人利用反向遗传学制备的冷适应性疫苗, 经试验验证, 能够对目前世界流行的H5亚型禽流感病毒产生有效的攻毒保护效力。冷适应疫苗存在着毒力返强, 新的流感毒株出现等一些潜在的风险因素, 使得有些国家对冷适应疫苗采取非常谨慎的态度。但是据有些国家多年来冷适应疫苗的临床应用, 并未出现流感病毒扩散的迹象。尽管如此, 冷适应疫苗的大规模使用, 还须对其生物安全性加以时间上的验证。 5 ptiha5疫苗 有人将含有编码甲型流感病毒核蛋白 (NP) 基因的重组质粒免疫小鼠, 攻毒结果显示, 免疫组小鼠产生了B细胞应答反应, 能抵抗同型流感病毒株的攻击。有人构建了H5亚型禽流感DNA疫苗p CA Ggopti HA5, 免疫效果良好, 成本低廉, 有望成为预防H5亚型高致病性禽流感的高效新型基因工程疫苗。有人研究了编码H5N1的病毒载体DNA疫苗的免疫作用, 结果表明, 疫苗成功诱导了HA特异性抗体和细胞免疫反应, 并成功地保护小鼠抵抗来自高致病性H5N1亚型禽流感病毒的攻击。禽流感DNA疫苗免疫剂量小, 容易制备和储存, 免疫反应针对表达的外源基因而非质粒载体。但核酸疫苗本身存在安全隐患, 外源DNA进入宿主体内有可能整合到宿主基因组DNA上, 使宿主细胞转化为癌细胞。少量抗原的长期表达, 很可能引起针对该抗原的免疫耐受。因此, 核酸疫苗投入使用前必须保证正确序列能在生产中保持稳定。 6 流感病毒的细胞 禽流感研究中所采用的反基因 (上接217页) 操纵方法被称为RNA poll/Ⅱ系统, 其原理是, 编码1个流感病毒节段的DNA质粒转录成负链的RNA, RNA与流感病毒粒PB1、PB2、PA和NP一起孵育形成核糖核酸蛋白 (RNP) 复合物, RNP转染入流感病毒预先感染的细胞, 采用适当的方法分离出带有转染节段的病毒, 从而获得流感病毒疫苗。有人建立了禽流感病毒GSGD/1/96株的8质粒反向基因操作系统, 在对无特