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植物转基因技术的诞生、发展和产业化 转换技术是将人工分离的基因移植到生物矩阵中，通过引入基因的表达，对生物体的性质进行可遗传遗传激活。经转基因技术修饰的生物体被称为“遗传修饰过的生物体”(genetically modified organism,GMO)。植物转基因技术诞生于20世纪80年代。在随后的二十几年里,转基因技术快速发展,不同种属、转入不同基因的转基因植物大量出现,部分转基因农作物已在农业生产中表现出巨大优势和潜力。目前美国的大豆、棉花和玉米等农产品大都通过转基因方式生产。2009年全球共有25个国家的1 400万农户种植了1.34亿公顷的转基因作物,获得了巨大的经济效益和社会效益。本文将简单介绍转基因技术的诞生、发展以及产业化。 1 预种植及转染植物 转基因技术可以追溯到20世纪60年代发展起来的DNA重组技术。科学家以核酸内切酶和连接酶为工具,将DNA分子切开,接入另一段DNA,将改造后的质粒DNA导入大肠杆菌,这就是经典的基因工程。而现在广义的基因工程则指按人们的意愿,设计或改造基因或基因组,从而改变生物的遗传特性,例如用重组DNA技术,将外源基因转入大肠杆菌中表达,使其能够生产人类所需要的产品;将外源基因转入动植物,构建具有新遗传特性的转基因动植物等。植物细胞具有全能性,在适合的培养条件下可以再生为新的植株。利用一定方法(通常是农杆菌介导)先将某个基因转入细胞,那么由该细胞分化发育而成的植株就是转基因植物。 转基因植物的研究始于20世纪70年代末80年代初。1977年Ackermann用野生型Ri质粒转化烟草细胞获得再生植株,1979年Marton等将Ti质粒转入烟草原生质体中,获得愈伤组织并再生出芽。1983年1月18日,Mary-Dell Chilton、Robb T.Fraley、Marc Van Montagu和Jeff Schell分别在Miami Winter Symposium会议上宣布利用农杆菌将外源基因转入植物体内获得成功,转基因植物从此诞生。随后有研究分别报道了用去除癌基因的根癌农杆菌及发根农杆菌进行基因转移,获得形态正常的转基因植物。1984年胡萝卜、牵牛花、白花烟草等植物相继获得转基因植株;1985年培育出转基因油菜。1985年Horsch等首创叶盘法进行植物遗传转化,他们利用根癌农杆菌感染烟草、番茄和矮牵牛叶片外植体,成功获得了转基因植物。这种方法简单且高效,开创了植物外植体进行遗传转化的新途径。1987年Sanford等建立了基因枪转化法,并成功转化了多种植物。早期农杆菌介导法只适用于双子叶植物的遗传转化,随后不久许多单子叶植物的遗传转化也获得成功。 据不完全统计,目前至少有35科120多种植物己成功培育出转基因植物,包括水稻、玉米、棉花、大豆、番茄、马铃薯、烟草、油菜、番木瓜等重要农作物;涉及的性状包括抗除草剂、抗虫、抗病害、抗逆以及品质改良等,另外还有一些转基因植物用作生物反应器的报道。部分转基因植物已商业化生产,并应用于食品和饲料。 2 遗传转化技术 传统的转基因技术经过20多年的发展,已相对比较成熟,但一些缺点开始逐渐暴露,例如插入位点随机,基因表达水平个体差异大,筛选过程中的抗性基因可能会造成生物安全问题等,因此近年来又发展出一些新的遗传转化技术,提高了转基因作物培育效率并使其更加适合生产应用。 2.1 植物质体转化技术 质体是植物细胞中具有独立基因组和转录翻译功能的细胞器。质体包括前质体(proplastids)、叶绿体(chloroplasts)、色质体(chromoplasts)以及各种白质体如淀粉体(amyloplasts)等,在植物细胞内的功能包括光合作用以及合成淀粉、色素、氨基酸等。与传统的细胞核转化相比,质体转化具有多种优势,例如可以实现外源基因的定点整合,通过操纵子结构可以同时控制多个基因表达,可获得高水平的蛋白质表达等。更重要的是,由于花粉细胞中不含质体,通过质体转化技术获得的转基因植物是母性遗传的,因此可以有效减少基因漂移,提高转基因植物的生态安全性。 1988年Boynton等首次在单细胞衣藻(Chlamydomonas reindhartii)中实现了叶绿体转化,1990年Svab等实现了在高等植物(烟草)中的质体转化,随后拟南芥、番茄、马铃薯、大豆、棉花等植物也成功进行质体转化。目前植物质体转化主要通过基因枪法进行,也有通过显微注射法和PEG法进行转化的报道。目的片段进入质体后发生同源重组,整合进入质体基因组并与之共同遗传。早期质体转基因植物利用质体16S rRNA(rrnl6基因作为标记基因,利用壮观霉素进行筛选,效率较低。Goldschmidt-Clermont建立了以aadA(aminoglycoside 3’-adenylyltran