ni2+冲击及恢复性驯化对厌氧颗粒污泥中古细菌种群多样性的影响.docxVIP

ni2+冲击及恢复性驯化对厌氧颗粒污泥中古细菌种群多样性的影响 作为金属酶的一个重要激酶或它的基本结合，金属离子在生物生活活动中起着重要作用。ni2+对细菌的生长并不需要。然而，近年来对装甲细菌营养需求的研究表明，ni2+不仅是组成硝基细菌氮和co脱氢酶的重要活性基团，也是重要的细菌毒素活性物质。作为装甲细菌生长所需的微金属养分，它激活了装甲细菌的代谢过程，对厌氧污泥的活性起到了一定的提高，促进了厌氧发酵过程。尤其是对于甲虫菌的ph30，ni2+具有其他微金属元素无法替代的效果，过量ni2+会抑制生物活性。考虑到古代细菌在厌氧消化过程中的重要作用，研究了ni2+对厌氧污泥中的古细菌影响机制，对提高厌氧处理系统中的有机物分解效率具有重要意义。 笔者通过向2-CP驯化后的厌氧颗粒污泥中投加高浓度的Ni2+, 从Ni2+冲击前后及恢复性驯化10 d后的厌氧颗粒污泥中直接提取总DNA, 用古细菌特异性引物ARC21F/ARC958R进行PCR扩增、克隆、测序及序列分析等, 以考察Ni2+冲击前后及恢复性驯化后降解2-CP厌氧颗粒污泥古细菌种群结构的变化, 以期在分子生物学水平上阐明Ni2+对降解2-CP厌氧颗粒污泥的古细菌种群结构的影响, 为提高有机物的厌氧降解效率提供一定的理论依据. 1 材料和方法 1.1 小反应器ni2+冲击后 试验装置为升流式厌氧反应器, 有大小2种尺寸. 大反应器用于污泥驯化, 内径150 mm, 外径250 mm, 高1 000 mm, 有效体积13 L. 小反应器用于Ni2+冲击及冲击后污泥的恢复性驯化, 内径50 mm, 外径80 mm, 高400 mm, 有效容积0.75 L. 1.2 预处理及光谱测试 接种污泥中w(Ni) 为0.2 μg/g. 2-CP厌氧降解污泥在大反应器中用葡萄糖和2-CP共同驯化, 并加入所需的营养元素液:MgSO485.2 mg/L, K2HPO450.0 mg/L, Ca (HCO3)223.2 mg/L, KH2PO420.0 mg/L, NiSO48.4 mg/L, FeSO46.8 mg/L, NaHCO31 220 mg/L, NH4HCO3780 mg/L. 进水CODCr控制在2 000 mg/L左右, 温度为 (37±1) ℃. 驯化后的污泥对25 mg/L的2-CP的去除率大于95%, 且效果稳定. 将2-CP驯化成功的颗粒污泥清洗过筛后装入小反应器中进行Ni2+的冲击试验. 进水为300 mg/L的Ni2+和25 mg/L的2-CP及相应配比的营养液 (镍盐除外) , 水力停留时间为12 h, 连续冲击3 d. 冲击之后, 系统进水基质与驯化期间进水基质相同, 以考察Ni2+冲击后厌氧系统对2-CP的降解能力及恢复状况. 2-CP的测定用HPLC法, 污泥中w(Ni) 在微波消解后用等离子体发射光谱仪测试. ICP光谱仪 (Optima 2100DV, 美国Perkin Elmer公司) , 检测器为全谱直读光谱检测器, 检测波长为231.6 nm, 温度为6 000～8 000 K. 1.3 总dna的提取和nd-pcr检测 从2-CP驯化稳定后 (25 mg/L) 的大反应器, 300 mg/L的Ni2+连续冲击3 d后及恢复性驯化10 d后的小反应柱中各取湿污泥约200 mg, 蒸馏水冲洗3遍, 5 000 r/min离心2 min, 弃去上清液, 用蛋白酶K, 氯仿/异戊醇方法直接抽提污泥样品的总DNA. 提取的总DNA用100 μL无菌超纯水溶解, 加入RNAase (质量浓度100 μg/mL) , 37 ℃温育30 min. 总DNA的片段大小和质量用0.8%的琼脂糖凝胶电泳 (DYB-I型电泳仪) 检验, 用紫外分光光度计 (BioPhotometor, Eppendorf公司) 测定其质量浓度为150 μg/mL. 1.41 srdna.9和k-pcr扩增 为考察Ni2+冲击对降解2-CP厌氧颗粒污泥古细菌种群结构的影响, 用古细菌特异性引物ARC21F (5′-TTC CGG TTG ATC CYG CCG GA-3′,E.Colinumbering 2～21) -ARC958R (5′-YCC GGC GTT GAM TCC AAT T-3′,E.Colinumbering 940～958) 扩增16S rDNA. 引物由invitrogen生物技术有限公司合成. PCR反应在Mastercycler Gradient (Eppendorf公司) 上进行, 50 μL的PCR反应体系为:10×PCR反应缓冲液5 μL, 10 mmol/L的dNTP溶液1 μL, 10 mmol/L引物对各1 μL, Taq酶2个单位, 样品DNA