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半棘肌肌纤维组织化学研究 根据三磷酸酶（parkon酶）的染色，不难将曼陀林肌肉肌肉的肌肉纤维分为i级缓慢收缩纤维和ii级快速收缩纤维，它们可以用于不同的功能。Peter根据肌纤维的代谢特征将I型、IIA型和IIB型分别归为慢缩氧化型、快缩氧化酵解型和快缩糖酵解型,并认为两种分型是相互对应的。Reichmann也采用琥珀酸脱氢酶反应以区分肌纤维类型。但ATP酶活性的高低反应肌纤维的收缩速度,而各种氧化酶,磷酸化酶的活性反应肌纤维的代谢特征,二者能否视为同一尚有待于进一步研究。本文应用ATP酶和琥珀酸脱氢酶染色法,研究大鼠、家兔和正常人颈后深部肌肉的组织化学特征,以比较两种肌纤维分型是否一致。 1 材料和方法 1.1 头半胶质瘤株 成年健康Wistar大鼠4只,体重150～200 g,成年健康家兔4只,体重2500～3000 g,雌雄兼用。处死后立即在颈5-6水平,于棘突两侧各取约5 mm×5 mm大小的头半棘肌,置液氮冷冻备用。用成人新鲜尸体4例,男3例,女1例,年龄44～62岁,生前无颈椎病和颈部处伤史,死亡后20小时内取材,于颈5-6水平棘突两侧各取约5 mm×5 mm大小的头半棘肌,置液氮冷冻备用。 1.2 相邻切片染色 标本作恒温冷冻-20℃切片,厚15μm,室温下空气干燥后作组织化学染色。在同一块组织的连续切片中,取相邻切片分别做ATP酶和琥珀酸脱氢酶染色。ATP用Padykula和Herman法,37℃(pH9.4)孵育30分钟,硫化钴黑色沉淀为阳性反应,I型纤维呈浅染反应,II型纤维呈深染反应。琥珀酸脱氢酶采用Poal法,37℃孵育30分钟,出现蓝色颗粒沉淀为阳性反应,根据反应强弱可分为深染、中染和浅染三型纤维。 1.3 肌纤维的计数 在光学显微镜下观察肌纤维的类型、形态和结构。每张切片随机取4个点,放大100倍显微摄像,再放大2倍洗印照片后计数肌纤维,每张照片含100～200条肌纤维,即每张切片或每个标本共计数400～800条肌纤维,然后计算各型纤维的比例。 2 大鼠、家兔和肌肉标本的采集 大鼠、家兔和人头半棘肌各型肌纤维的形态结构和所占的比例,左、右两侧比较均无显著性差异,故将每侧标本作为一个独立的标本统计,大鼠、家兔和正常人肌肉标本各8侧。 2.1 iii型纤维的形态 ATP酶染色特征在ATP酶染色切片上,头半棘肌肌纤维可分为I型和II型,I型纤维较粗、染色浅,II型纤维较细、染色深,两型纤维交错排列,横切面呈多边形或椭圆形(图1～3)。在大鼠、家兔和正常人I型纤维均显著多于II型纤维,t=11.56～14.78,P0.01;从种系角度比较,大鼠、家兔和人I型和II型纤维所占的比例均无显著性差异,t=0.43～1.42,P0.05(附表)。 2.2 型肌纤维的生产 在琥珀酸脱氢酶染色切片上,肌纤维呈蓝色,可分为深染、中染和浅染三型。深染纤维染色颗粒大、染色较深、分布均匀;中染纤维染色颗粒大小不等,横切面上周边染色较深,中央区染色较浅;浅染纤维颗粒细小、染色较淡、分布均匀。三型肌纤维交错排列,横切面呈多边形或椭圆形(图4～6)。在大鼠、家兔和正常人,深染、中染和浅染纤分别约占25%、25%和50%;横切面积深染纤维较小,中染和浅染纤维较大。从种系角度比较,大鼠、家兔和人各型肌纤维所占的比例均无显著性差异,t=0.38～1.92,P0.05(附表)。 3 表现了不同类型纤维的表现 Peter根据肌纤维收缩速度、糖酵解能力和氧化能力将成年豚鼠和家兔肢体肌的肌纤维分为I型、IIA型和IIB型,分别归为慢缩氧化型、快缩氧化酵解型和快缩糖酵解型。即I型、IIA型和IIB型纤维分别相当于琥珀酸脱氢酶染色的中染(中度琥珀酸脱氢酶活性)、深染(高度琥珀酸脱氢酶活性)和浅染(低度琥珀酸脱酸酶活性)纤维。但本组材料表明,ATP酶染色,大鼠、家兔和人I型纤维均多于II型纤维,分别约占60%和40%;琥珀酸脱氢酶染色,大鼠、家兔和人中染、深染和浅染纤维分别约占25%、25%和50%。比较两种染色方法,I型纤维(60%)与中染纤维(25%)、II型(IIA和IIB)纤维(40%)与深染和浅染纤维(25%和50%)所占的比例相差甚远。佟豫和陈玮将ATP酶和琥珀酸脱氢酶染色作对应观察,发现小鼠、大鼠、豚鼠和兔腓肠肌I型纤维的吻合率为83%,II型纤维的吻合率为68%,认为琥珀酸脱氢酶染色不能与ATP酶染色分型视为等同。Reichmann和Pette利用显微分光光度计测定肌纤维琥珀酸脱酸酶反应的相对强度,证明在大鼠、豚鼠、兔和猫四种动物,用ATP酶反应分类的IIA型和IIB型纤维其琥珀酸脱氢酶染色强度相互重叠,IIA型纤维由弱到强的分布幅度较IIB纤维更宽。Brbova认为,长期训练可使肌细胞内线粒体含量增加,琥珀酸脱氢酶活性增强,是一种