地塞米松磷酸钠对大鼠激素性股骨头坏死模型的影响.docxVIP

地塞米松磷酸钠对大鼠激素性股骨头坏死模型的影响 1957年，彼得格洛伊木和马斯洛米林首次报告了使用糖皮质激素（以下简称激素）引起的骨坏死的并发症。随着激素的大量使用,人们已经认识到大量、长期地使用激素是导致骨坏死并发症的重要原因。激素是继外伤之后引起股骨头坏死的第二大原因,约占股骨头坏死的3%~38%,约25%的激素治疗患者会发生骨坏死。特别是SARS期间,激素作为不可替代的药物应用于临床的治疗,却因此造成了大量患者的股骨头坏死。激素治疗造成骨坏死已经引起了医学界的广泛重视。国内外目前大多利用兔、鸡来建立激素性股骨头坏死模型。本实验对成年Wistar大白鼠肌注地塞米松磷酸钠而建立早期大鼠激素性股骨头坏死的动物模型,观察激素注射后不同时期股骨头病理变化,评价大鼠激素性股骨头坏死特点。 1 材料和方法 1.1 周后分组及分组 4月龄健康Wistar大白鼠36只,由天津医科大学实验动物中心提供,雌雄各半。适应性喂养2周后,随机分成两组:实验组24只,对照组12只。精确称重后,实验组肌肉注射地塞米松磷酸钠(10 mg/kg),对照组肌肉注射生理盐水(2 ml/kg),每周1次,共注射14周。两组均于肌肉注射药物后2、6、8、10、12、14周处死动物,实验组每次4只,对照组每次2只。 1.2 c、形2h-2-甲基苯磺酸盐 取大白鼠双侧股骨头,尽量去除股骨头周围软组织后置入10%中性甲醛固定液,固定24 h,30%甲酸脱钙3 d,脱钙完全后,流水冲洗,梯度乙醇脱水,二甲苯透明处理2 h,石蜡包埋。制成4μm厚切片,常规HE染色,用双目Olympus光学显微镜分别在40×、100×、400×下观察,经摄像后存于Image-pro-plus图像分析系统的计算机中,分别测得股骨头单位面积内骨小梁面积百分率和骨小梁宽度,最大脂肪细胞直径,每高倍镜视野下空泡陷窝数量。 1.3 以树胶注染红色蓝黑色组 组织石蜡包埋后,制成4μm厚切片,二甲苯脱蜡后至水,后入重铬酸钾-醋酸液1h,水洗后染苏木素10 min。自来水冲洗后,用2%盐酸乙醇分化,流水冲洗到蓝黑色。1%丽春红酸性品红液中染5 min,蒸馏水洗。1%磷钼酸水溶液媒染5 min,不经水洗入2%淡绿液3 min,1%醋酸液分色1 min;脱水、透明、中性树胶封固。100×光镜下观察骨小梁内胶原分布情况,经摄像后存于Image-pro-plus图像分析系统的计算机中,测得单位面积骨小梁内胶原含量。 2 结果 2.1 骨小梁损伤和骨髓水肿 对照组:骨小梁结构清晰,排列规则整齐,致密饱满,见图1。骨小梁陷窝内可见大量骨细胞,骨细胞清晰可见,核较大,位于中央,偶可见空骨陷窝,见图2。实验组2周:骨细胞核紧靠一侧骨陷窝壁,固缩,深染,空骨陷窝轻度增多。6周:软骨下区骨小梁变细,间距增大,结构紊乱,有断裂现象。骨髓腔内脂肪细胞增多、增大,造血细胞减少,出现骨髓水肿,见图3。8周:出现游离骨碎块。骨髓腔内脂肪细胞增多、增大明显,并出现脂肪细胞互相融合,造血细胞减少明显,骨髓水肿面积增大,见图4。10周:骨小梁断裂现象进一步增多,出现不止一块游离骨碎块。骨髓腔内脂肪细胞多、增大明显。12周:骨髓腔内脂肪细胞相对8周减少,可见较多融合脂肪细胞,并出现脂肪细胞坏死的溶解现象,造血细胞减少明显,骨髓水肿面积进一步增大。14周:骨小梁结构十分紊乱,出现大范围的骨小梁断裂和明显的骨小梁连续性中断,大量游离骨碎块,见图5。骨髓腔内脂肪细胞己近消失,更多的是脂肪细胞坏死溶解现象,有大面积的骨髓水肿。骨小梁空泡陷窝充满,空泡陷窝增加明显,见图6。 2.2 素注射2周后开始 实验组股骨头单位面积内骨小梁面积百分率从激素注射2周后开始较对照组明显下降(P0.01),见表1。激素注射6周起实验组骨小梁宽度较对照组有显著差异(P0.01),见表2。 2.3 股骨最大脂肪细胞直径的测量 实验组股骨头内脂肪细胞最大直径于激素注射6周时开始较对照组明显增大,有显著统计学意义(P0.01),见表3。 2.4 根据高倍镜下空气泡形成的数量 实验组每高倍镜视野下空泡陷窝数量于激素注射2周后较对照组增多,有显著性差异(P0.01),见表4。 2.5 激素注射前后胶原分布 对照组:骨小梁间胶原分布均匀,单位骨小梁面积内胶原含量较高,见图7。实验组:激素注射后胶原分布呈逐步杂乱现象,见图8。单位面积骨小梁内胶原含量从激素注射后6周开始出现减少,较对照组有显著性差异(P0.01),特别是激素注射8周后,见表5。 3 激素对骨髓水肿作用的影响 股骨头坏死是指股骨头内的活性成分(骨细胞、骨髓造血细胞及脂肪细胞)死亡所引起的病理过程。在股骨头内,出现不同程度的骨小梁及骨髓组织坏死,是股骨头坏死的本质特征。骨小梁坏死在病理学上表现为骨小梁的骨陷窝内原有的骨细胞