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植物酵素对酒精性肝损伤小鼠的预防及治疗作用 酒精的历史很悠久。随着现代社会经济的发展和社会进步，饮料消费也日益增加。过度消费已成为全社会关注的社会安全问题。据报道, 适量饮酒有益于人身体健康, 但急性大量饮酒能引起恶心、呕吐、记忆力减退、注意力不集中, 严重时可因呼吸肌麻痹而死亡。长期饮酒可导致酒精性肝炎、脂肪肝、肝硬化等严重疾病。因此美国热销解酒药RU21和我国解酒药物解酒保健茶、解酒灵、醒酒肽饮料、茶多福胶囊等解酒保肝类产品的面世对于酒精性饮品日益增多的今天有重要的临床意义和社会价值。 酵素类饮品风靡于日本、台湾等地区, 受到当地人的广泛青睐, 但是其提取工艺略有不同。本实验采用的植物酵素是采用传统的绿色发酵工艺, 不添加任何食品添加剂, 从50余种新鲜的水果、蔬菜、菌类等植物中提取的酵素精华液, 它含有多种营养成分, 如低聚糖、黄酮、皂苷、多酚类物质等, 具有润肠通便、解酒等作用。本实验以小鼠为研究对象, 按照《保健食品检验与评价技术规范》(2003版) 规定及相关文献研究植物酵素对酒精性肝损伤小鼠是否有预防及治疗作用。 1 材料和方法 1.1 试剂与试剂盒 植物酵素:吉林敖东大高酵素有限公司, 批号110801;乙醇脱氢酶试剂盒、还原型谷胱甘肽试剂盒、考马斯亮兰蛋白测定试剂盒、丙二醛 (MDA) 试剂盒、谷丙转氨酶试剂盒、谷草转氨酶试剂盒:南京建成生物工程研究所;TG试剂盒:浙江东瓯诊断产品有限公司;阳性对照药联苯双酯滴丸:北京协和药厂, 产品批力克:辽宁力克制药公司;RU21:美国进口。 1.2 实验动物 昆明种小鼠, 雄性, 体重18~22 g, 吉林大学实验动物中心, 合格证号:SCXK- (吉) 2008-0005。饲料来源同上。 1.3 实验方法 1.3.1 酒精性肝损伤模型的建立和指标的测定 1.3.1. 植物酵素外施液对小鼠口灌胃的影响 小鼠按体重, 随机分为模型对照组、空白对照组、阳性对照组和低、中、高剂量组, 每组10只。其中低、中、高3个剂量组经小鼠口灌胃给予植物酵素剂量分别为10、20、30m L/kg BW, 模型对照组和空白对照组给予蒸馏水的剂量为20 m L/kg BW, 阳性对照组给予联苯双酯23 m L/kg BW。动物3 d称重一次, 按照体重调整受试样品剂量, 连续灌胃30 d。 1.3.1. 肝脏组织病理学检测 受试样品结束时将模型对照组及各样品组一次灌胃, 给予50%乙醇14 m L/kg BW, 空白对照组给蒸馏水, 禁食16 h处死动物, 取肝脏组织进行各项指标的检测及病理组织学检查。 用于检测指标的样本前处理:准确称取待测组织的质量, 加生理盐水制成10%的组织匀浆, 3000 r/min离心10 min。然后取组织匀浆上清液, 加入生理盐水, 稀释成1%组织匀浆, 待测。操作过程见各实验试剂盒使用说明。 1.3.2 预防和处理植物酶 1.3.2. 灌酒时效试验 取40只雄性昆明种小鼠, 随机分成模型组、实验组、阳性药物Ⅰ组、阳性药物Ⅱ组, 每组10只。4组小鼠先禁食12 h, 自由饮水再进行如下实验处理: 实验组灌胃植物酵素0.2 m L/10 g BW;模型组灌胃生理盐水0.2 m L/10 g BW, 阳性药物Ⅰ组灌胃力克0.2 m L/10 g BW, 阳性药物Ⅱ组灌胃RU21284.2 mg/10 g BW。 给药30 min后各组分别灌胃50°白酒0.165m L/10 g BW。灌酒后记录各组小鼠醉酒数、死亡数、醉酒耐受时间 (从灌完酒到翻正反射消失时间) 和醒酒时间 (从翻正反射消失到恢复所需的时间) 。小鼠醉酒与否以翻正反射是否消失为标准:小鼠灌酒后将其背向下轻轻放入动物笼, 若动物背向下的姿势保持30 s以上, 则认为翻正反射消失, 即为醉酒。 1.3.2. 植物酵素饮料的配制 取40只雄性昆明种小鼠, 随机分成模型组、实验组、阳性药物Ⅰ组、阳性药物Ⅱ组, 每组10只。4组小鼠先禁食12 h, 自由饮水, 先灌胃50°白酒0.165 m L/10 g BW, 再进行如下实验处理: 实验组灌胃植物酵素0.2 m L/10 g BW, 模型组灌胃生理盐水0.2 m L/10 g BW, 阳性药物Ⅰ组灌胃力克0.2 m L/10 g BW, 阳性药物Ⅱ组灌胃RU21284.2 mg/10 g BW。 灌药后记录各组小鼠醉酒数、死亡数、醉酒耐受时间和醒酒时间。 1.3.3 酒精性肝损伤 依据《保健食品检验与评价技术规范》 (2003版) 酒精性肝损伤检验方法及文献报道。实验数据用方差分析进行统计处理。各组数据用ue0af±s表示, P0.05为差异显著, 具有统计学意义。 2 结果与分析 2.1 小鼠体重的变化 由表1可见:喂养前, 动物随