中药十八反对大鼠肝细胞色素p450酶含量的影响.docxVIP

中药十八反对大鼠肝细胞色素p450酶含量的影响 18个热是中医理论的重要组成部分，是中医七情“对立”配合的具体体现。目前，这项研究主要集中在对该现象的确认上，而对该机制的解释很少。现代医学理论认为,药物间的“反”应指它们间不良的相互作用,药物经肝脏代谢时,通过影响肝药酶产生相互影响,是药物相互作用的途径之一。因此本实验选择测定大鼠肝微粒体细胞色素P450酶含量,观察乌头、半夏、栝楼、贝母、白蔹和白及各药单药组、配伍组对P450酶及b5含量的影响,通过比较十八反药物中的一组“半楼贝蔹及攻乌”,以探讨其配伍药物在肝药酶途径的相互影响,为今后中药复方配伍研究提供实验依据。 1 材料表面 1.1 实验动物中心 2级Wistar大鼠,体质量180～220 g,雌雄各半,由军事医学科学院实验动物中心提供,常规饲养。实验动物质量合格证号:SCXK-(军)2002-001,动物实验设施使用证号:SYXK-(军)2002-001。 1.2 实验药物 实验药物购自北京市同仁堂药店和安国药市(固定产地),水煎制备,浓缩成1 g/mL,置4℃保存备用。 1.3 血清标准蛋白和试剂 连二亚硫酸钠(北京化工厂);一氧化碳(CO)(北京夏天气体厂);牛血清标准蛋白(总后药检所);Folin酚试剂(北京欣经科生物公司);高速冷冻离心机,DU-640核酸蛋白分析仪(BECKMAN公司)。 1.4 大鼠给药剂量实验 大鼠随机分为11个给药组和1个正常对照组,每组18只,灌胃给药,正常对照组给予等量的生理盐水,2次/d,连续3、7、14 d。根据《中华人民共和国药典》(2000年版)有关人用各药的剂量范围,取高限用量进行预实验,按体表面积换算成大鼠给药剂量,各组实验给药剂量分别为:乌头组0.25 g/(kg·d);半夏组、贝母组、白蔹组1.51 g/(kg·d);栝楼组、白及组2.51 g/(kg·d)。 2 实验方法 2.1 灌流肝脏,灌流肝脏 分别于给药3、7、14 d后禁食12 h以上断头处死动物,迅速打开腹腔,作肝门静脉插管,用预冷的生理盐水灌流至肝脏颜色变为土黄色为止。取出肝脏称质量,按肝脏组织∶缓冲液(1∶4)加pH 7.5(TMS)缓冲液制备匀浆,用钙沉淀法制备微粒体悬液。 2.2 不同指标样品对cod-pcr测定 Lowry法测定微粒体蛋白悬液蛋白含量,根据各样品的蛋白含量,用pH7.4的Tris缓冲液稀释微粒体蛋白悬液至0.5 mg/mL,共6 mL,分成2管。一管作为空白对照管,另一管加20μL连二亚硫酸钠(0.1 g/mL)混匀,作为b5样品测定管,400～500 nm扫描测定样品b5含量;取出上述空白对照管倒入原管中,加20μL连二亚硫酸钠(0.1 g/mL)混匀,冲CO 1 min,作为P450酶样品测定管,上述b5样品测定管作为空白对照管,400～500 nm扫描测定P450酶含量。计算公式: 2.3 压力值的比较 实验数据以均数±标准差()表示,两组间的差异显著性分析用方差分析。表中显著性表示方法:与正常对照组比较*P0.05,**P0.01,***P0.001;与乌头组比较#P0.05,##P0.01,###P0.01;与其相应单药组比较▲P0.05,▲▲P0.01,▲▲▲P0.01。 3 结果 3.1 两组配伍p450酶含量比较 结果表明,乌头、半夏单药组药后14 d大鼠肝细胞色素P450酶含量均显著增加,与正常对照组比较统计差别显著(P0.05或P0.01);两药配伍后P450酶含量与其相应单药组比较显著降低(P0.01),与正常对照组比较无统计差别(P0.05);乌头单药组药后14 d大鼠肝细胞色素b5含量显著增加,与正常对照组比较统计差别显著(P0.01),两药配伍药后7、14 d b5含量与其相应单药组比较显著降低(P0.05),与正常对照组比较无统计差别(P0.05)。 3.2 胞色素p450酶检测 结果表明,栝楼组及乌头与栝楼配伍组药后对大鼠肝细胞色素P450酶含量无影响(P0.05);两药配伍药后14 d b5含量与其相应单药组及正常对照组比较显著降低(P0.05或P0.01)。 3.3 组患者的统计差别p/0.05,正常对照组与正常对照组比较 结果表明,乌头与贝母两药配伍药后14 d P450酶含量与其相应单药组比较显著降低。(P0.05或P0.01),与正常对照组比较无统计差别(P0.05);贝母组药后7、14 d大鼠肝细胞色素b5含量显著增加,与正常对照组比较统计差别显著(P0.05),乌头与贝母两药配伍药后7 d b5含量显著低于贝母单药组(P0.05),药后14 d b5含量与相应单药组及正常对照组比较显著降低(P0.001)。 3.4 不同单药组p450酶含量比较 结果表明,白蔹单药组药后14 d大鼠肝