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2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的分子机制研究 2型糖尿病（t2sd），即非胰岛素依赖于糖尿病的特点。它以胰岛素抵抗、胰岛素敏感性降低和糖代谢紊乱为特征。随着中国社会老龄化和高糖高脂肪生活习性的改善，t2dm逐年增加，给家庭和社会带来了巨大的经济负担，已成为中国必须解决的社会问题。目前，我国尚未有效的防病毒药物仍缺乏，其发病机制尚不清楚。许多研究人员使用不同的动物模型来研究t2d的发病机制，其中高脂肪糖饲料（hfd）和链-行李菌素（stz）主要用于腹腔注射诱导t2d模型。虽然较少的研究对肝组织中氨酸（酶）含量的变化缺乏全面的系统研究。通过高脂肪高胆固醇、低糖饮食指南（stz）和低剂量瘦素（酶）的选择性破坏肝组织细胞，建立二维模型，检测肝组织的生物化学（ros）和内源性脲醇（酶）的含量，探讨肝组织的氧化反应与胰岛素抵抗之间的关系，为探索t2d的发病机制提供新的思路。 1 数据和方法 1.1 氧化氮、丙二醛、丙二醛、谷胱甘肽、glutsh STZ由美国Sigma公司提供.一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)、诱导型一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS),一氧化氮(nitric oxide,NO)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase,GR)、总抗氧化能力(total antioxidative capacity,T-AOC)和总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutases,T-SOD)试剂盒为南京建城生物试剂公司生产. 1.2 灌胃乳剂制备胆固醇 清洁级Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠60只,6周龄,体重(200±10)g,购自昆明医学院实验动物中心,动物生产许可证号:SCKK(滇)2005-0008,室温(20±2)℃,自然光照,自由进水进食,随机分为正常对照组(20只),高脂高胆固醇灌胃加糖水喂养组(HFD组,40只).正常对照组喂以普通饮食,HFD组以高脂高胆固醇灌胃加糖水喂养诱发胰岛素抵抗(insulin resistance,IR):高脂高胆固醇灌胃乳剂配制(把250 mL猪油水浴加热至98℃后,加入5 g已经充分研磨成粉末状的胆固醇,混合后再在高温98℃水浴中充分混合均匀形成胆固醇脂肪混悬液:脂肪98%,胆固醇2%);以高脂高胆固醇灌胃(2次/d、5 mL/次),饮水(10%蔗糖).灌胃3个月后,用口服葡萄糖耐量实验(oral glucose tolerance test,OGTT)检测两组大鼠胰岛素的抵抗性,并检测血清糖化血清蛋白(FMN)、甘油三酯(triglycerides,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TCHOL)、超敏C反应蛋白(C reactive protein,CRP)、血糖(GLU)、C肽(C-peptide,C-P)和血胰岛素(insulin,INS).然后将HFD组腹腔内注射STZ,即高脂高胆固醇灌胃、糖水喂养加STZ注射组(STZ+HFD组):腹腔内注射STZ(20 mg/kg),3 d后再注射1次(STZ,20 mg/kg),选择性摧毁胰岛细胞诱发高血糖症.继续喂以高脂(普通饲料在液态50℃猪油中浸泡1 min)、高胆固醇(占猪油的1%)、高糖(糖水5%)2月.检测血清FMN、TG、TCHOL、CRP、GLU、C-P、INS和肝组织中NOS、iNOS,NO、MDA、GSH、GR、T-AOC、T-SOD的含量. 1.3 检测方法 1.3.1 眼内瞳静脉血清学检测 血标本采集时间通常在上午10点钟以后,3.6%水合氯醛麻醉下(1 mL/100 g)眼内眦静脉取血,GLU于3 h内检测,而FMN、TG、TCHOL、CRP、C—P和INS在2 h内先于2 000 rpm离心10 min取出血清,置于-40℃冰箱中保存后自动生化仪上进行检测. 1.3.2 glu、inf-l-4检测glu和inf 大鼠夜间空腹10~12 h,内眦静脉取血(2 mL)后,给予葡萄糖2g/kg灌胃,2 h后内眦静脉取血,分别测GLU及INS.由于大鼠血量有限,每次采血3 mL,OGTT只检测0 min和2 h. 1.3.3 胰岛素抵抗 按HOMA模型计算胰岛素抵抗指数(insulin resistance index,IRI): 以此反映研究对象的胰岛素抵抗程度. 1.3.4 相关蛋白测定 STZ+HFD组高脂高糖喂养2月后,将大鼠麻醉,快速断头,取出肝组织,称重,用生理盐水制成10%的组织匀浆,离心,取上清液用相关试剂盒测定NO、SOD、GR、GSH、MDA、TNOS、i