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rp-me-asp-phenh2四肽的液相合成 mcclovac含有于肠粘膜、大脑和周围器官，以及激素和神经流质的作用。CCK已被用于临床,外源性CCK在临床上已经被应用于胆囊、胰腺功能的诊断;也有报道CCK用于治疗肥胖症、食欲不振、胃病等;还可用于治疗老年痴呆症。 CCK的活性部分在C-末端,其最小活性片段是Trp-Met-Asp-PheNH2四肽。CCK片段的合成一般采用活性酯法、叠氮法、DCC法或固相法,合成周期长,成本较高。因此,合成研究主要集中在温和条件、高选择性的固相合成,即酶法合成和CCK非肽类似物。 混合酸酐法操作简单,反应速度快,产率较高,是最经济的一种方法,但存在易消旋化的缺点。Tilak等对其作了一些改进,羧基组分使用烷氧羰基氨基酸,并在低温下反应以减少消旋,得到产物后脱去烷氧羰基保护基,再进行下一步反应。重复这一操作可以逐渐从N端向C端延长肽链。文献报道的合成路线采用逐步合成的方法,但操作烦琐,合成时间长,收率较低(仅为15%)。而混合酸酐法具有反应速度快,接肽效率高的特点。因此,我们采用重复过量混合酸酐法(REMA法)合成了目标分子CCK-4(图1)。总合成路线短,操作简单易行,收率提高到38.5%,得到的目标化合物(6)的旋光值为-22°,与文献值接近(-26.5°)。 H?PheNH2【math37z】Cbz?Asp(OBn)?PheNH2?→?H2Pd/C12H?Asp?PheNHΗ-ΡheΝΗ2【math37z】Cbz-Asp(ΟBn)-ΡheΝΗ2→Η2Ρd/C12Η-Asp-ΡheΝΗ 2?→??????IBCF?NMMBoc?Met?OHBoc?Met?Asp?PheNH2→ΙBCF?ΝΜΜBoc-Μet-ΟΗBoc-Μet-Asp-ΡheΝΗ 2?→?TFA342→ΤFA34 H?Met?Asp?PheNH2?→??????IBCF?NMMBoc?Trp?OHBoc?Trp?Met?Asp?PheNH2Η-Μet-Asp-ΡheΝΗ2→ΙBCF?ΝΜΜBoc-Τrp-ΟΗBoc-Τrp-Μet-Asp-ΡheΝΗ2 5 6 图1CCK-4的合成路线 Fig 1The synthetic route of CCK-4 1 实验部分 1.1 试剂和仪器 所用试剂和溶剂均为市售分析纯;柱层析和薄层层析硅胶(青岛海洋化工厂,化学纯)。1HNMR测定用Unity INVOA 400型核磁共振仪(DMSO-d6为溶剂,TMS为内标);IR测定用Nicolet-MX-1 型红外波谱分析仪;MS测定用Finnigan LCQ-DECA 型质谱仪。 1.2 合成方法 1.2.1N-苄氧羰酰-(β-苄酯)-L-天门冬氨酰-L-苯丙酰胺(2)的合成 将5.000 g(14 mmol)N-苄氧羰酰-(β-苄酯)-L-天门冬氨酸溶于50 ml无水DMF中,冰盐浴冷却下滴加氯甲酸异丁酯 1.912 g(14 mmol),继续搅拌5 min,滴加L-苯丙酰胺(1)6.690 g(14 mmol)和N-甲基吗啉 1.420 g(14 mmol),升至室温后搅拌3 h,倾入100 ml冰水中,过滤,滤饼用水洗涤,得到黄色固体,重结晶后得白色固体5.6 g,收率80%,mp 171℃~173℃,1HNMR δ: 2.77(m, 2H), 2.94(m, 2H), 4.35(m, 1H), 4.73(m, 1H), 5.10(dd, 4H), 7.29(m, 15H),8.27(d,1H),9.66(d,1H);MSm/z:504(M++H+)。 1.2.2L-天门冬氨酰-L-苯丙酰胺(3)的合成 将7.500 g2悬浮于甲醇(400 ml)和水(40 ml)中,投入5%钯-碳 1 g,常压氢解至反应物完全消失,过滤,滤液浓缩后得到白色固体3.55 g,收率 87%,mp 183℃~184℃,1HNMR δ: 2.77(m, 2H), 2.94(m, 2H), 4.35(m, 1H), 4.73(m, 1H), 7.29(m, 5H), 8.27(d, 1H),9.66(d,1H)。MSm/z:279(M+)。 1.2.3N-叔丁氧羰酰-L-甲硫氨酸-L-天门冬氨酰-L-苯丙酰胺(4)的合成 将N-叔丁氧羰酰-甲硫氨酸2.100 g (8.4 mmol) 溶于30 ml无水DMF中,冰盐浴冷却下滴加氯甲酸异丁酯1.147 g(8.4 mmol),继续搅拌5 min后滴加L-天门冬氨酰-L-苯丙酰胺(3)2.352 g(8.4 mmol)和N-甲基吗啉 0.850 g(8.4 mmol),升至室温后搅拌3 h,倾入冰水(100 ml)-醋酸(1 ml)中,过滤,滤饼用水洗涤,得白色固体,重结晶后得到白色固体3.5 g,收率