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植物不同器官中可溶性糖和可溶性蛋白质的测定 近年来，蓟马逐渐成为主要的农业害虫，尤其是地带类别作物病虫害。西花蓟马自2003年在我国首次被发现报道以来,其发展动向一直受到普遍关注,国内对其发生规律、生物学特性和防治方法等进行了初步的研究探讨。西花蓟马食性杂,寄主植物有60多科500余种,在国内发现其寄主植物有28科65种,包括各种常见蔬菜作物和红掌、菊花等花卉作物。有研究认为植物中可溶性蛋白质和可溶性糖的比例影响植食性害虫的寄主选择行为,可溶性蛋白质含量高,害虫的存活率、生长发育速度和生殖力相对提高;可溶性糖能够刺激害虫取食,并且是重要的营养物质和能量来源,且蔗糖能够促进某些蓟马品种产卵。本试验选取西花蓟马的寄主植物为研究对象,测定植物成熟叶和幼叶中可溶性糖和可溶性蛋白质的含量及其比例,旨在为解释西花蓟马对寄主的选择行为提供依据。 1 材料和方法 1.1 样品的补充、分级 样品的制备:从温室采集茄子、甘蓝、辣椒、黄瓜、番茄、菜豆、红掌的成熟叶和幼叶及菊花、辣椒和红掌的花器,分别洗净(花蕊除外)、晾干后测定鲜质量,风干后再测定干质量,计算鲜质量、干质量比例。取风干或鲜样品6 g研磨成粉状,称取2 g放入具塞试管中,加入95 %乙醇18 mL,用超纯水补至20 mL,摇匀。在80 ℃水中煮30 min,冷却后用 95 %乙醇补至20 mL。将上清液过膜至样品瓶中,待检测。每样品4次重复。 植物中可溶性糖主要由蔗糖、葡萄糖、果糖和其他微量化合物如氨基糖等组成,本试验选择寡糖(棉子糖)、双糖(蔗糖)和单糖(葡萄糖和果糖),利用高压液相色谱(HPLC)分析叶片中各种糖含量。采用Agilent 1100高压液相色谱仪(安捷伦),岛津SCR-101(C)糖柱,流速为1.0 mL·min-1,每样品进样量为10 μL。 糖含量=A样×C标×V标×定容体积×鲜、干质量比例A标×V样×2g=A样×C标×V标×定容体积×鲜、干质量比例A标×V样×2g 式中C标指棉子糖、蔗糖、葡萄糖和果糖标准品的浓度,V标为1 μL,V样为10 μL,A样为样品的峰面积,A标为标样的峰面积。干样品计算时不用乘鲜、干质量比例。 1.2 标准曲线的制作 样品制备:将风干的样品研磨至粉末状,称取10 mg于1.5 mL离心管中,加入0.05 mol·L-1Tris-HCl(pH=8,下同)1.5 mL,在漩涡振荡器上振荡1 min,再放在4 ℃恒温振荡器上振荡24 h。取出后离心10 min(4 ℃,13 000 r·min-1,下同),用Whatman 1号定性滤纸过滤上清液,再用0.05 mol·L-1Tris-HCl 3 mL分两次冲洗,滤液一并装入5 mL的离心管中。取滤液20 μL至1.5 mL离心管中,加入200 μL丙酮(-20 ℃,下同),充分混合,放入-20 ℃冰箱中30 min后取出,离心10 min。弃去上层丙酮溶液,保留固体物质,再加入200 μL丙酮,同样操作再重复1次,得到洁净的蛋白样品。每样品4次重复。 二喹啉甲酸(Bicinchoninic acid,BCA)测定可溶性蛋白质含量:测定时在样品管中加入0.05 mol·L-1Tris-HCl 20 μL,使蛋白质充分溶解,然后转移至96孔酶标板中,再加入200 μL BCA工作液,在37 ℃恒温箱中放置30 min后取出,室温下冷却15 min后在562 nm波长下检测。 牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)标准曲线:将2 mg·mL-1的BSA用Tris-HCl按等比稀释成8个浓度,用酶标仪测定制作标准曲线。 试验数据采用SAS统计软件进行分析处理,差异显著性分析采用邓肯式多变域测验。 2 红掌不同植物叶片红掌糖含量的比较 蔗糖是植物中最主要的可溶性糖,在18个样品中蔗糖含量占可溶性糖80 %以上的有14种,其中茄子成熟叶、菜豆成熟叶和菜豆幼叶中蔗糖含量占90 %以上;棉子糖的含量相对最低,在茄子成熟叶、茄子幼叶、甘蓝幼叶和番茄成熟叶中几乎未检测到棉子糖,辣椒幼叶中棉子糖含量最高,其次是黄瓜成熟叶和红掌花蕊,且辣椒幼叶和黄瓜成熟叶棉子糖含量显著高于其他样品;红掌花瓣中葡萄糖和果糖的含量最高,均极显著高于其他样品;除红掌、菜豆外,一般成熟叶中果糖含量大于相应植物幼叶(表1)。 由表1可知,总体上,植物成熟叶中可溶性糖含量高于相应的幼叶(除茄子外);红掌不同器官可溶性糖含量不同,花瓣花蕊成熟叶幼叶;红掌花瓣的可溶性糖含量最高,达到6.34 mg·g-1,是茄子成熟叶的57.6倍;可溶性糖含量高的前6种植物叶片,主要是因为蔗糖含量高所致,但含量最高的红掌花瓣是因为其葡萄糖和果糖含量最高。 茄子叶片中可溶性蛋白质含量最高,均极显著高于其他样品;一般成熟叶的可溶性蛋白质