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电针对sd大鼠脊髓背角广动力型神经元激活的影响 针灸和艾灸的原始功能单位不同，因此在关节和肠道之间形成了相对特定的联系。当内脏处于疾病状态时, 体表某些穴位或部位可出现各种敏化现象, 这种敏化可能是热敏、痛敏、压敏等感觉的变化, 也可能是临床上通过医生的诊断观察到穴位处丘疹、凹陷以及结节状或条索状物等形态特征表现。针刺体表穴位对内脏的感觉和运动功能具有特异性调整功效, 因此, 体表穴位和内脏存在功能和状态的特异性联系。而随着疾病的痊愈, 这种敏化现象减弱乃至消失, 说明穴位的功能活动是一个动态的过程。当内脏处于疾病状态时, 穴位反应和治疗内脏疾病的功能可以增强。 为了探讨内脏处于生理和病理的不同状态时, 体表穴位功能和敏感程度的动态变化和机制, 本研究观察了给予大鼠伤害性内脏扩张刺激后, 体表穴位电针刺激对脊髓背角广动力型 (wide dynamic range, WDR) 神经元激活效应的影响, 为揭示穴位功能和敏感程度的动态变化过程及其脊髓机制提供科学依据。 1 材料和方法 1.1 实验动物及许可证:scxk-军2007-400 健康成年Sprague-Dawley雄性大鼠22只, 体质量250~300g, 清洁级, 由军事医学科学院实验动物中心提供, 许可证号:SCXK- (军) 2007-004。动物实验前禁食12h, 不禁水, 实验过程中对动物的处置遵循2006年科技部颁布的《关于善待实验动物的指导性意见》。 1.2 皮肤损伤的预防 给予动物10%的乌拉坦 (1.2g/kg) 腹腔注射麻醉, 然后行气管插管术。于背部正中线切开腰部皮肤, 暴露L1-3节段脊髓, 移至立体定位仪 (DGY-79A, 吉林长春) , 在显微镜下剪开硬脊膜, 用游丝镊撕开软脊膜, 然后用38℃石蜡油覆盖, 以免脊髓干燥。最后腹腔注射三碘季胺酚, 接通呼吸机进行人工呼吸。实验全过程中动物体温通过反馈型加热仪 (瑞沃德CL-8) 控制在37℃左右。 1.3 培育特殊神经元 采用充灌5%氯化钠和滂胺天蓝溶液的玻璃微电极 (阻抗约8~12MΩ) , 在微电极操纵器 (SM-21, 日本成茂) 控制下根据WDR神经元的三维空间坐标将记录电极插入脊髓背角, 寻找所需神经元。WDR神经元的坐标定位为:脊髓后正中裂旁开0.5~1.5mm, 脊髓表面下500~1 500μm。神经元放电信号经微电极引入8301微电极放大器及Power-Lab电生理记录系统, 进行神经元放电信号的放大和处理。 1.4 内脏伤害性预防 内脏伤害性刺激采用直结肠扩张 (colorectal distention, CRD) 法, 将一个长约4~6cm的气囊经肛门插入直结肠, 插入的深度约为5~6cm, 内脏伤害性传入由插入直结肠内的气囊充气1min来实现。为避免造成直结肠壁和肛门的刺激, 置入时在气囊上涂抹温热的石蜡油。插入后气囊部分与肛门距离0.5cm, 避免刺激肛门。实验时气囊扩张压力控制在80mmHg (1mmHg≈0.133kPa) , 为避免出现过度刺激造成直结肠敏感化, 重复CRD刺激间隔5min以上。 电针刺激通过刺激器 (88-102G, 日本光电) 输出。频率:15Hz;持续时间:2ms;电针强度:1mA、4mA、7mA、10mA。电针穴位选择与直结肠同神经节段的同侧“足三里”穴区。 1.5 ddr神经元对电针的激活反应 记录到放电信号稳定的神经元后, 首先检查神经元对体表非伤害性刺激 (触摸、刷毛、有齿镊夹夹皮) 的反应, 观察其外周感受野的分布范围。然后试验这些神经元对伤害性刺激 (40~60mmHg CRD、3mA电针刺激同侧“足三里”穴区) 的反应, 若神经元对伤害性和非伤害性刺激均发生反应, 就被定义为WDR神经元, 随即进入记录程序。 一个标准的记录程序设定为:先记录10s的神经元背景活动, 然后给予30s电针刺激, 之后停止电针刺激, 待神经元放电恢复后, 给予持续1min的80mmHg CRD刺激, 之后停止CRD, 待细胞放电恢复后, 再给予30s电针刺激。观察CRD刺激前后, 在相同强度和相同穴位电针刺激条件下, WDR神经元对电针的激活反应是否发生变化。 在实验记录过程中, 为了避免重复电针刺激和CRD刺激造成实验的干扰, 每个记录周期随机给予一种强度电针刺激。若WDR神经元对电针和CRD刺激发生强敏化反应, 停止刺激后不能恢复背景放电, 该神经元则被剔除。 1.6 实验大鼠脑电极 单细胞记录结束后, 由刺激器输出20μA的负向直流电20~30min, 通过玻璃微电极将滂胺天蓝电极液导入大鼠脑组织, 以标记记录位置。将动物经心脏灌流固定, 取脊髓组织做冰冻切片, HE染色观察, 参考大鼠脑立体定位图谱 (PaxinosWatson, 200