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莲子体内两种黄酮甙的提取和鉴定 荷花心是睡莲科植物的一种古老的绿色幼叶和胚胎，苦而寒冷。它能净化心脏的安宁，使心脏的肾脏和涩精转为止血。主要用于兴奋、喉咙干渴、出血、红眼和胸痛。在我国其主要产于浙江、江苏、福建、湖南等地。莲子心生物碱研究始于l9世纪末, 此后国内外学者进一步将莲子所含生物碱分为非酚性生物碱和酚性生物碱, 主要有莲心碱 (liensinine) , 异莲心碱 (isoliensinine) , 甲基莲心碱 (neferine) , 荷叶碱 (nuciferine) , 牛角花碱 (lorusine) , 甲基紫堇杷灵 (methylcorypalline) , 莲子碱 (nelumbine) 等。 黄酮广泛存在自然界的植物和浆果中, 大约有4千多种。但其化学结构不尽相同, 如绿茶多酚、芸香苷、橘皮苷、栎素、花色苷酸等都属黄酮。黄酮的功效是非常丰富的, 它是一种很强的抗氧化剂, 可有效清除体内的氧自由基, 可阻止细胞衰老和退化, 也具有阻止癌症发生的抗氧化作用。它还可以改善血液循环, 减少血液中的胆固醇, 大大降低了动脉粥样硬化的发病率, 也可改善心脑血管疾病的症状。为了进一步开发利用黄酮资源, 我们对莲子心黄酮类化合物的提取分离工艺进行了研究, 并利用波谱技术鉴定了两个碳甙黄酮的结构。 1 材料和方法 1.1 路径二、实验用树脂 仪器:紫外光检测器, 旋转蒸发仪, 核磁共振仪等。材料:莲子心, 2009年9月购自福建省医药有限责任公司;D101大孔吸附树脂;硅胶;Sephadex LH-20 (羟丙基葡聚糖凝胶) ;MCI (微孔树脂) ;RP-18 (十八烷基硅烷键合硅胶) ;硅胶粉, 硅胶板H (中国青岛海洋化工集团公司) ;工业级甲醇;其余有机试剂均为分析纯。 1.2 黄酮类物质的检测 1.2.1 莲子心中黄酮类物质的提取、分离及纯化: 1.2.2 黄酮类物质的定性检测:层析柱所分离出的化合物使用薄层色谱分析。采用硅胶薄层层析板, 以氯仿-甲醇-水 (体积比为8∶2∶0.2) 为展开剂。展开后的硅胶板, 在紫外光365nm下, 黄酮类物质呈现黄色荧光;用分子碘熏呈棕色;经5%的稀硫酸溶液 (乙醇∶水=1∶1) 烘烤呈黄色。 1.2.3 黄酮类物质的结构鉴定:核磁共振分析:将分离出的黄酮类单体物质溶解于氘代二甲基亚砜 (DMSO-d6) 中, 在核磁共振仪上测定氢谱 (1H NMR) , 碳谱 (13C NMR) , 异核远程相关谱 (HMBC) , 异核单量子相关谱 (HSQC) 。以四甲基硅烷为内标物, 并与参考文献比对确定化合物结构。 2 结果与讨论 2.1 糖及糖教育化合物c-4 化合物1呈淡黄色粉末状, 经5%的稀硫酸溶液 (乙醇∶水=1∶1) 烘烤后呈黄色, 易溶于甲醇。氢谱 (1H NMR) δ:7.51 (1H, d, J=8.4, J=2.0, H-6′) , 7.48 (1H, d, J=2.0, H-2′) , 6.88 (1H, d, J=8.4, H-5′) , 6.63 (1H, s, H-3) , 6.33 (1H, s, H-6) , 4.66 (1H, d, J=7.6, H-1″) 。碳谱 (13C NMR) δ:182.0 (C-4) , 164.1 (C-2) , 162.8 (C-7) , 160.3 (C-5) , 156.0 (C-9) , 149.7 (C-4′) , 145.8 (C-3′) , 121.9 (C-1′) , 119.4 (C-6′) , 115.8 (C-5′) , 114.1 (C-2′) , 104.5 (C-8) , 104.0 (C-10) , 102.4 (C-3) , 98.2 (C-6) , 82.0 (C-5″) , 78.8 (C-3″) , 73.4 (C-1″) , 70.8 (C-2″) , 70.7 (C-4″) , 61.7 (C-6″) 。1H NMR图谱显示:共有6个氢, 低场区有两个在7.51, 6.88且偶合值是8.4的氢信号和在7.48且偶合值是2的氢信号, 判断为苯环上的ABX自旋体系, 且1, 3, 4位被取代;同时两个在δ6.63和6.33的单峰;存在1个端基质子信号 (δ4.66, J=7.6) , 说明这个糖是β-D-葡萄糖甙;13C NMR图谱表明:δ182.0处的信号为羰基, 在δ145.8～164.1区间有6个连氧碳信号, δ102.4处有1个烯烃碳信号, 在δ121.9～98.2区间有7个芳香碳信号, 可推断该化合物为黄酮类化合物, 通过以上的分析并参考文献可以得出该化合物为木犀草素糖甙。从13C NMR来看只有1个δ73.4处的信号表明含有C糖甙, δ61.7为糖上亚甲基。在δ82