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精子dna损伤与宫腔内人工授精妊娠率的关系 辅助生殖技术（ai）的应用越来越广泛。宫内内的生殖器官检测（iui）是治疗虐待性移民（妊娠）疾病的常用方法。适应性症状主要包括轻度少弱性酒精、宫颈疾病、反射性避孕和非个体经育障碍，成功率为5%-66%。目前认为,精子浓度、精子活动力、精子畸形率等参数虽不能准确预测IUI妊娠结局,却是选择IUI还是IVF或者ICSI治疗的重要依据。很多患者精子参数轻度异常或在正常范围,但经历多个IUI周期并不能妊娠,最终需要IVF甚至ICSI治疗。所以,临床迫切需要某些精子参数指标,能更有效地预测IUI的妊娠结局,从而避免反复的IUI治疗,帮助患者选择经济有效的ART方案。 研究发现,不育男性精子染色质缺陷和DNA断裂率较生育男性要高。精子DNA缺陷可能影响ART成功率,有研究认为,精子DNA完整性的异常影响IUI妊娠结局。但是,也有学者认为,精子DNA完整性的异常与IUI妊娠结局的关系有一定的局限性。精子核或DNA完整性的检测方法有精子染色质结构分析法(sperm chromatin structure assay, SCSA)、精子染色质扩散试验(SCD)、彗星试验(COMET)、末端转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷(dUTP)末端标记法(TUNEL)等。SCSA从上世纪80年代开始应用于临床,较其它几种方法更为稳定。SCSA检测指标为精子DNA碎片指数(DNA fractionation index, DFI),研究发现DFI超过30%难以自然妊娠和通过IUI获得妊娠,但亦有不同意见。国内有报道,DFI与精子参数有一定相关性,不育症男性DFI异常率较生育组高。DFI对IUI妊娠结局的影响,尚未见报道。为了进一步研究DFI的临床意义,评估其作为IUI妊娠结局预测指标的可行性,开展了本项研究。 1 精子scsa检测 1.1研究对象 2009年11月至2010年11月在本院生殖医学科实施IUI治疗的482对不孕夫妇,其中女方年龄21～40岁,平均28岁;男方年龄21～40岁,平均28岁。男方精液洗涤前精子浓度5×106/ml,洗涤后前向运动精子总数(total progressive motile sperm count, TPMC)应1×107,低于此标准应交待成功率可能会下降并签署相关知情同意书。女方的纳入标准:①女方年龄不超过40岁;②子宫输卵管碘油造影或腹腔镜证实至少一侧输卵管通畅;③超声监测有优势卵泡发育及排卵。所有患者均签署了知情同意书,并且该研究经医院伦理委员会同意。 1.2精液采集、分析及制备 在人工授精日手淫法采集精液,精子处理前后均分析精液,精子浓度采用Makler计数板计数,精子活力评估参照世界卫生组织颁布的指南。精液采集后1 h内吸取0.3～0.5 ml精液冻存在-80 ℃冰箱以备将来行SCSA检测。精液制备使用80%和40%的Puresperm (Nidacon, 美国)洗涤弃去上层液,将沉淀再次离心洗涤处理,收集沉淀混匀配制0.5 ml备用。 1.3SCSA SCSA检测精子DNA碎片的原理和操作方法主要根据Evenson等报道的方法进行。精子酸暴露后染色质结构损伤的精子DNA双链变性成单链,吖啶橙染色后,没有损伤的精子DNA保持双链,吖啶橙结合则呈单体形式发出绿色荧光;受损的精子DNA双链解链成单链,吖啶橙结合后呈聚合物发出红色荧光。通过流式细胞仪(FCM)检测精子荧光信号,结合FCS Express软件(De Novo Software, 加拿大)计算,单个精子DFI值描述为红色/(红色+绿色)荧光强度×100%,即单个精子变性DNA占总DNA的比例;每份样本至少检测5 000个精子,整份标本的DFI值用主群以外精子所占百分比来表示,即DNA受损害的精子占总精子数的比例。 1.4IUI治疗 配偶根据自身情况行自然周期IUI,或选择促排卵药物如克罗米芬(塞普路斯公司)、来曲唑(Leltozol,诺华制药公司)、尿促性腺激素(hMG, 丽珠公司)、果纳芬(默克雪兰诺公司)。B超持续卵泡监测,优势卵泡发育成熟后,肌肉注射hCG 5 000～10 000 IU,在注射hCG后的次日下午(24～36 h)行IUI。有部分患者在卵泡直径平均达到18 mm后没有注射hCG情况下自然排卵,则在监测后的当天下午行IUI治疗。女方取膀胱截石位,暴露宫颈后,用1 ml的注射器与一次性人工授精管(COOK公司)相连接,吸取精子混悬液,缓慢注入宫腔,抬高臀部保持仰卧位约20 min。术后行常规黄体支持,2周后检测血β-hCG,明确是否生化妊娠,4周后行B超示妊娠囊可见,则确定为临床妊娠。 1.5统计学分析 本文数据资料来源于江苏省临床生殖医学管理系统(CCRM)。选用SPSS 17.0统计分析软件,