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混料试验设计优选纤维素酶的复配条件 纤维素是世界上最具价格的资源。我国农作物秸秆年产量达7亿多吨，玉米秸秆的生物降解在解决粮食、能源、环境污染等问题中起到巨大的作用。将玉米秸秆降解制备燃料酒精、木糖、单细胞蛋白、饲料、糠醛等产品的研究正引起越来越多的科研工作者和政府管理部门的重视。 在纤维素的酶法糖化工艺中，降低纤维素酶的成本是该工艺在经济上能否过关的关键因素之一，所以确定适宜的酶用量尤为重要。由于纤维素酶是一种多组分的复合酶，不同微生物合成的纤维素酶其酶系组成不尽相同，对纤维素的水解能力也有差异。 目前对纤维素酶的作用方式有C1-Cx分阶段水解的理论，认为纤维素酶是复合酶系，Cx酶首先作用于结晶纤维素，使其改变成可被C1酶作用的形式，C1酶随机水解非结晶纤维素的1-4糖苷键，然后β-葡萄糖苷酶将纤维二糖水解为葡萄糖。纤维素酶水解纤维素需要多种酶系成分的协同作用，而且各种酶之间的比例也要协调，使酶系组成更适合纤维素原料的水解。 采用混料试验设计方案对纤维素酶进行复配实验，可以用较少的试验次数得到最佳的配比。混料设计是研究包含多种成分产品的一种响应曲面试验类型。目前，混料试验设计已广泛应用于各组分间有交互作用的实验研究中。 该实验采用混料试验设计中的单纯形质心方法对纤维素酶进行配方设计，通过分析试验结果建立回归方程，考察各组分对水解效果的影响，以纤维素酶的水解率为评价指标，并进行优化，探讨纤维素酶复配优化的新方法。 1 材料和方法 1.1 基于商品纤维素酶的复配效果 纤维原料，玉米秸秆产自连云港，其组分为：纤维素28.80%、半纤维素16.56%、木质素17.54%、灰分9.32%。 基于购买的商品纤维素酶的效价考虑，主要考察以下生产厂商纤维素酶制剂的复配效果。纤维素酶(Celulase)无锡高润杰科技有限公司；纤维素酶(ZSL-1300)山东泽生生物科技公司；纤维素酶(Accellerase1000)杰能科国际公司。 1.2 u3000实验设备 FZ102微型植物粉碎机天津泰斯特仪器有限公司；752S紫外可见分光光度计上海棱光技术有限公司；DSHZ-300A旋转式恒温振荡器太仓市实验设备厂；BS124S电子天平上海安亭科学仪器厂。 1.3 方法 1.3.1 初始ph值的确定 称取1.50g底物玉米秸秆，根据实验设计表加入适量10倍稀释酶液，和30ml 0.05mol/L的柠檬酸缓冲溶液调节酶解初始p H值，在50℃的恒温振荡水浴锅中100r/min酶解。酶解20h后取酶解液离心分离，上清液用DNS法测其总还原糖含量。 1.3.2 糖含量的测定 还原糖含量采用DNS(3,5-二硝基水杨酸)法测定。 1.3.3 单位fiu 酶活力测定采用NRE L推荐的标准方法测定，一个滤纸酶活力的国际单位(F PIU)等于在标准反应条件下每分钟生成1μm ol葡萄糖的酶量。内切葡聚糖酶活力，用羧甲基纤维素(CM C)测定。β-葡萄糖苷酶酶活采用p NPG(对硝基苯酚-β-D-葡萄糖苷)试剂测定。 1.3.4 实验设计和结果分析 根据前期实验数据结果，本实验选取杰能科、高润杰、泽生三个不同商品纤维素酶源作为因素，并通过设置下限和上限来约束设计进行试验，使用软件Minitab(R)15.1.0.0.随机化生成设计表，Minitab提供了三种混料设计(单纯形质心、单纯形格点和极端顶点)，本实验采用单纯形质心设计，并对实验结果进行数学模型建立和参数优化。试验设计分量和约束如表1。 2 结果与分析 2.1 纤维素酶活性测定 由表2可知，三个纤维素酶的酶活和酶系组成都有差异，杰能科的β-葡萄糖苷酶和滤纸酶活最高，泽生的CMC酶活最高为17.35IU。 2.2 杰能科纤维素酶复配正交试验 以X、Y、Z为自变量，以糖浓度为响应值，试验设计与结果见表3。 从水解结果的回归模型方程(表4)C=1.88X+1.90Y+1.91Z+1.35X Y+0.68X Z+3.01Y Z-20.28X2Y Z+8.34X Y2Z(R2=0.997)可以看出,3个纤维素酶复配后,组分间存在显著的相互作用,复配的目的也就是通过不同的纤维素酶组分间的酶系相互作用来调节酶系组成,提高酶解效率减小酶用量进而降低成本。 曲面图(图1)和等值线图(图2)都显示纤维素酶经过复配后可以提高玉米秸秆的水解率，杰能科纤维素酶与泽生纤维素酶体积比为1:1时水解效率最高糖浓度为2.66g/L。单一纤维素酶作用的情况下糖浓度分别为泽生1.91g/L、杰能科1.91g/L、高润杰1.88g/L。 3 纤维素酶使用效果 由以上混料设计试验得出玉米秸秆酶水解的酶复配最佳条件为：泽生与杰能科生产的纤维素酶体积比1:1时复配效果最好，比使用单一纤维素酶效率提高了39.5%，这对于提高纤维素酶的水解率、降低纤维素酶