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三物白散对寒痰证祛痰作用及配伍机制研究 三个物的白散来自伤寒。这是著名的加热剂，由巴豆、桔梗和贝母按1:3.3的比例组成。临床应用以感冒粘液为主的胸闷和胸闷。有胸闷或心下硬痛，拒绝压迫，呼吸困难。《医学入门》卷五:“寒痰因形寒饮冷,色深青黑如灰,善唾,或喘”。本实验根据寒痰因形寒饮冷的原理,通过冰水浴和灌胃冰水制备小鼠“寒痰证”模型,对酚红气管排泌实验进行改进,以酚红排泌量、祛痰指数、肺质量系数、肺质量抑制率为指标,通过观察三物白散组方中药味同排列组合构成的样本药物对动物模型祛痰作用的影响,结合聚类分析,探讨三物白散的配伍机制。 1 材料表面 1.1 巴豆霜、盐酸氨溴索片、苯酚红 巴豆、桔梗、梭砂贝母均购于四川新荷花中药饮片股份有限公司,由成都中医药大学标本中心卢先明教授鉴定;巴豆霜为实验室自制;盐酸氨溴索片(上海勃林格殷格翰药业有限公司),苯酚红(天津市试剂研究所,批;550型酶标仪(美国Bio-rad公司);LG10—2.4A高速台式离心机(北京医用离心机厂)。 1.2 实验动物 昆明种小鼠,18～22 g,普通级,四川省医学科学院动物研究所提供,合格证号:SCXK(川)2008-15。 1.3 模型分组与给药 三物白散全方组:贝母30 g、桔梗30 g加8倍水煎煮两次,每次30 min,滤过并适当浓缩,加入巴豆霜粉末配制成1.75 g/mL混悬液。巴豆+贝母组:贝母30 g加8倍水煎煮两次,每次30 min,滤过并适当浓缩,加入巴豆霜粉末配制成1 g/mL混悬液。巴豆+桔梗组:桔梗30 g加8倍水煎煮两次,每次30 min,滤过并适当浓缩,加入巴豆霜粉末配制成1 g/mL混悬液。贝母+桔梗组:贝母30 g、桔梗30 g加8倍水煎煮两次,每次30 min,滤过并浓缩至1.5 g/mL。巴豆组:取巴豆霜粉末10 g,加入适量温水中,配制成0.25 g/mL混悬液。桔梗组:桔梗30 g加8倍水煎煮两次,每次30 min,滤过并浓缩至0.75 g/mL。贝母组:贝母30 g加8倍水煎煮两次,每次30 min,滤过并至0.75 g/mL。正常对照组与模型对照组均灌胃生理盐水;阳性对照组:取盐酸氨溴索片适量,研碎后加入适量水混悬。 2 方法 2.1 造模实验动物 取小鼠100只,雌雄各半,均分为10组,分别是正常对照组、模型对照组、阳性对照组、三物白散全方组、巴豆+贝母组、巴豆+桔梗组、贝母+桔梗组、巴豆组、桔梗组和贝母组。除正常对照组外,各组实验动物均进行造模。将小鼠每天早上置于冰水浴中水浴5 min,下午ig冰水(20 mL/kg),连续造模3 d后,各组给予相应的药物。参考孙广仁等关于评价成功建立慢性阻塞性肺疾病寒饮蕴肺证大鼠模型的方法,以确定模型建立是否成功。 2.2 实验标准 各实验组连续灌胃给药7 d,1次/d,正常对照、模型对照组分别ig生理盐水0.5 g/kg,阳性对照组给药剂量为30 g/kg,其他7组给药剂量分别为35、20、20、30、5、15、15 g/kg。末次给药前禁食不禁水12 h。参考文献方法,末次给药30 min后,ip 0.5%酚红溶液0.5 m L/只。30 min后,颈椎脱臼处死小鼠,仰位固定于手术板上,剪开颈前皮肤,分离气管,剥去气管周围组织,剪下自甲状软骨至气管分支处的一段气管,放进盛有3 m L生理盐水的试管中冲洗,再加入5%碳酸氢钠溶液0.1 m L。将气管灌洗液离心,取上清液,用酶标仪(波长570nm)测定吸光度(A)值,计算祛痰指数;将各实验动物两侧肺叶取出,称定质量,计算肺质量系数和肺质量抑制率,并进行组间比较。 2.3 处理数据 实验数据以表示,采用SPSS 13.0中 One-way ANOVA 检验判断组间差异,采用聚类分析法进行层级聚类。 3 结果 3.1 巴豆+培养苏贝粉的降血药浓度 以各组A值、祛痰指数、肺质量系数、肺质量抑制率作为评价指标,结果见表1。可见与模型对照组比较,阳性对照组、全方组、巴豆+贝母、巴豆+桔梗组均能明显促进A值和祛痰指数增加,肺质量系数降低(P0.05),说明阳性对照、全方、巴豆配伍桔梗、巴豆配伍贝母均有较强的祛痰效果;与全方组比较,唯有阳性对照组、巴豆+贝母、巴豆+桔梗组差异无显著性(P0.05),说明具有较强祛痰效果的几个实验组中,阳性药、巴豆合用桔梗、巴豆合用贝母和全方的祛痰效果相差不明显。 3.2 欧间内最短距离法 以祛痰指数和肺质量抑制率为评价指标,将7个实验样本采用SPSS 13.0进行层级聚类分析。采用组间内均值连接法连接样本点群,测量欧式距离,用组间内最短距离法作图,见图1。可见当距离小于14时,拆方后所得的7种配伍组合分成4类,结合实验指标的排序情况,按照对此动物模型的祛痰作用的强弱,依次分为:三物白散全