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高效液相色谱法测定生地与地膜的成分比较 地黄是玄参科植物的新鲜或干燥土壤。鲜地黄清热生津、凉血、止血、用于热病伤阴, 舌绛烦渴, 发斑发疹, 吐血, 衄血, 咽喉肿痛。生地黄清热凉血、养阴、生津, 用于热病舌绛烦渴、阴虚内热、骨蒸劳热、内热消渴、吐血、衄血、发斑发疹。熟地黄滋阴补血、益精填髓, 用于肝肾阴虚、腰膝酸软、骨蒸潮热、盗汗遗精、内热消渴、血虚萎黄、心悸怔忡、月经不调、崩漏下血、眩晕、耳鸣、须发早白。现代药理研究发现, 地黄具有调节免疫功能, 影响血液系统、内分泌系统、中枢神经系统等各方面活性, 并具有抗衰老及降血糖等多方面功效。本课题组多年来对地黄的降血糖机制进行了研究, 发现其调节血糖的主要成分是地黄寡糖。文献报道环烯醚萜苷类中的梓醇可能是地黄降血糖作用的有效成分之一。加工炮制过程中有效成分的变化是其药性发生改变的根本原因, 因此本实验对炮制前后的地黄中梓醇和糖类进行了研究, 为地黄的炮制机制研究提供参考。 1 仪器、试剂与仪器 SCL—6A高效液相色谱仪, Shimadzu RID—6A示差折光检测器 (日本) , Millennium32色谱管理系统;Waters高效液相色谱仪, Waters996紫外检测器, Waters600泵;Mettler AE240电子分析天平 (瑞典) , SK7200H超声波清洗器 (上海科导超声仪器有限公司) , FZQ—2涡旋混合器 (江苏泰县医疗器械厂) , 微量进样器 (上海安亭微量进样器厂) 。 葡萄糖 (北京化学试剂三厂) , 果糖 (中国药品生物制品检定所, 批号1504-200001) , 半乳糖 (德国EMERCK公司) , 楝二糖 (Sigma-Aldrich, 批号1362360) , 蔗糖 (北京化学试剂三厂) , 棉子糖 (西安舟鼎国生物技术有限公司, 批号DH258) , 水苏糖 (United Kingdom, 批号065K3775) 。生地药材购于河南怀庆、河南新乡、河南西峡等地, 经兰州大学药学院曹宗钧教授鉴定, 与《中国药典》2005年版一部正品相符, 熟地药材由同批生地根据《中国药典》2005年版一部熟地黄“制法 (2) 项蒸法”及附录Ⅱ D炮制而成, 其他试剂均为分析纯, 水为重蒸水。 2 方法和结果 2.1 hplc法测定山羊成分 2.1.1 检测设备和流程 色谱柱为Phenomenex NH2柱 (150 mm×4.6 mm, 5 μm) , 检测器为Shimadzu RID—6A示差折光检测器, 流动相为乙腈-水 (72∶28) , 体积流量为1.0 mL/min, 柱温为室温, 进样量20 μL。色谱图见图1。 2.1.2 水苏糖溶液的制备 分别称取葡萄糖、果糖、半乳糖、楝二糖、蔗糖、棉子糖、水苏糖对照品8 mg, 精密称定, 置1.5 mL离心管中, 精密加1 000 μL水溶解, 制成8 mg/mL的溶液, 0.45 μm滤过, 得滤液, 备用。 2.1.3 超声法提取液制备液制备液制备水液制备液 分别称取生地、熟地1 g, 精密称定, 加水20 mL, 超声提取30 min, 放冷, 用水定容至25 mL, 取1 mL, 5 000 r/min, 离心, 上清液0.45 μm滤过, 得滤液, 备用。 2.1.4 蔗糖和蔗糖 结果见表1。可见生地中的水苏糖的量相对较高;熟地中的甘露三糖的量相对较高;二者中棉子糖的量也有较显著的差异, 生地中含35.1 mg/g, 熟地中含14.4 mg/g;二者中蔗糖和楝二糖的量没有显著性差异;由于果糖是酮基六碳糖、葡萄糖和半乳糖是醛基六碳糖, 结构相近, 色谱柱难以分离开, 没法测定, 但是从生地和熟地水提取物的色谱图可以看出熟地中的果糖的量高于生地。 2.2 银醇hplc法的测定 2.2.1 检测波长和测定波长 Waters996紫外检测器, Waters600泵, C18柱 (150 mm×4.6 mm, 5 μm) , 检测波长为210 nm, 流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液 (1∶99) , 体积流量1.0 mL/min, 柱温为室温, 进样量20 μL 。色谱图见图2。 2.2.2 流动相甲醇-0.1%磷酸溶液的制备 称取梓醇对照品适量, 精密称定, 用流动相甲醇-0.1%磷酸溶液 (1∶99) 制成10 μg/mL的溶液, 0.45 μm滤过, 得到滤液, 备用。 2.2.3 超声-样品法 分别称取生地、熟地0.5 g, 精密称定, 加甲醇5 mL, 超声提取30 min, 放冷, 用甲醇定容至5 mL, 滤过, 水浴蒸干, 残渣用流动相甲醇-0.1%磷酸溶液 (1∶99) 溶解定容至5 mL, 0.45 μm滤过, 得到滤液, 备用。 2.2.4 测量结果的比较 结果见表2。可