丝裂霉素c治疗准分子激光屈光性角膜切削术后角膜上皮下雾状混淆作用的实验研究.docxVIP

丝裂霉素c治疗准分子激光屈光性角膜切削术后角膜上皮下雾状混淆作用的实验研究 准分子激光折叠成像（prk）切割组织准确，安全性好，预测性好，光谱稳定。它已成为治疗中、低度视力改善的主要方法，并取得了良好的效果。然而,该手术存在的主要问题是角膜上皮下雾状混浊(haze),它不仅影响术后视力而且造成屈光回退,亟待解决。本实验通过局部应用0.2 g·L-1丝裂霉素C(mitomycin C,MMC)溶液滴眼,并与1.0g·L-1地塞米松溶液进行对比,观察药物对PRK后haze形成的影响,以寻找一种新的防治haze安全有效的方法。 1 材料和方法 1.1 下其它大鼠眼 新西兰白兔41只(由南京军区总医院实验动物中心提供),体重2.1～3.0kg,无眼部病变,雌雄兼用,随机分为3组,每组27眼。Ⅰ组为MMC组,Ⅱ组为地塞米松组,Ⅲ组为对照组。 1.2 jcm-2加削法 30g·L-1戊巴比妥钠全麻兔后,用PTK法(频率13.0Hz,能量密度180mJ·cm-2)去除角膜中央8mm直径上皮。然后行PRK,切削参数:-9.00D,深度97μm,直径7mm,频率10Hz,能量密度120mJ·cm-2。使用激光器为美国Coherent公司生产的Schwind Keratom-F型准分子激光治疗机。 1.3 l-2mmc/l-1地塞米松滴眼 术毕所有眼涂金霉素眼膏。术后第1天始,Ⅰ组用0.2 g·L-1MMC滴眼,每日4次,共14d;Ⅱ组用1.0g·L-1地塞米松滴眼,术后1～4周,每日4次,术后5～8周,每日2次;Ⅲ组滴平衡盐液, 每日4次,共14d。 1.4 术后观察 1.4.1 皮质愈合时间 每天观察眼前段情况,滴10 g·L-1荧光素钠染色检查角膜上皮直至其完全愈合,记录角膜上皮愈合时间。术后1、4、8周检查haze情况,同时摄取角膜像,按Fants等级分类法分5级并记分,即0级为0分,0.5级为0.5分,1～4级分别为1～4分。 1.4.2 膜成像及内科医生 术后1、4、8周行角膜中央内皮检查,观察内皮细胞形态改变、细胞密度、六角形细胞百分率及细胞面积变异系数。 1.4.3 标准染色—光学显微镜检查 术后1、4、8周随机活杀兔取术区角膜,其1/2置于100 g·L-1中性甲醛液固定,常规石蜡切片,HE染色。观察角膜上皮再生、基质成纤维细胞及纤维排列情况。 1.4.4 透射电镜检查 取上述角膜片的另1/2浸于25g·L-1戊二醛液固定。观察角膜组织的超微结构改变。 1.5 ze积分的差异 所有数据采用SPSS软件包进行统计学处理。用秩和检验分析各组haze积分的差异。角膜上皮愈合时间、内皮细胞密度、内皮细胞面积的变异系数、内皮六角形细胞百分率等数据,用单因素方差分析进行总体均数的显著性检验,对有差异者采用q检验分别进行2组间均数的显著性检验。 2 结果 2.1 审查中的裂缝灯 2.1.1 膜过渡时间 3组均于术后5～6d完全愈合,经统计学分析差异无显著性(P0.05)。 2.1.2 各组haze普遍加重 术后1周,各组haze积分平均值均为0～0.5分,经统计学分析差异无显著性(P0.05)。术后4周,各组haze普遍加重,术后8周仍明显,均以Ⅲ组为最明显(P0.05),Ⅰ、Ⅱ组差异无显著性(P0.05)。各组不同时间段haze积分平均值变化见表1。 2.2 前基质成纤维细胞增殖情况 术后1周,Ⅰ组和Ⅱ组可见4～6层上皮细胞,上皮形状及排列较规则,前基质层见中等量成纤维细胞,纤维排列较整齐;而Ⅲ组可见5～7层上皮细胞,上皮细胞排列紊乱、形状各异,前基质成纤维细胞明显增多,呈活跃增殖状态,纤维排列紊乱,新生基质厚度大于Ⅰ组和Ⅱ组。术后4周,Ⅲ组上皮细胞7～9层,基底细胞大小不一,呈不规则柱状结构,前基质成纤维细胞明显增多,功能活跃,胶原纤维增生、排列紊乱明显,纤维间隙较大;Ⅰ组和Ⅱ组上皮细胞5～7层,细胞大小基本均匀,前基质成纤维细胞数较术后1周时为多,但明显少于Ⅲ组,纤维排列轻度紊乱。术后8周,光镜下改变基本同第4周。3组不同时间段后基质层、Descement膜和内皮层均未见异常。 2.3 胶原纤维的形态变化 术后1周,Ⅲ组上皮基底细胞异常增大,核分裂像增多,上皮细胞内大量扩张的粗面内质网、明显肿胀的线粒体及呈网状分布的微丝;前基质见大量成纤维细胞,细胞肥大、胞浆丰富,胞浆内空泡形成。扩张的粗面内质网增多明显,线粒体肿胀,高尔基体发达,且含有丰富的微管、微丝。核淡染,染色质着边,细胞周围可见新合成的胶原纤维,其粗大、疏松、排列紊乱,呈交叉排列。Ⅰ组和Ⅱ组电镜下改变基本相同,与Ⅲ组比较上皮细胞核较少见,细胞分裂无亢进,细胞内可见中等量细胞器,前基质成纤维细胞数较少、核分裂像不明显,胶原纤维排列轻度紊乱。术后4周,Ⅲ组上皮基底细胞仍增大,前基