大肠癌患者肠道菌群的变化.docxVIP

大肠癌患者肠道菌群的变化 通过对直肠菌群与正常人口之间常见肠道细菌的比较，作者选择了两种具有代表性的需氧和选择性细菌。三种具有代表性的厌氧菌（曲线菌）、双壳菌和乳酸杆菌进行了定量和定量比较，探讨了腺瘤患者和正常肠菌群之间的差异，并为制定和治疗结肠癌等新方法提供了新思路。 为2009年1月至2009年8月行大肠癌镜检取材、病理证实患者30例,其中男16例,女14例,年龄52~72岁,平均62岁;正常人群对照组30例,年龄45~69岁,平均52岁.所选病例为正常人群、大肠癌确诊患者且手术前未做内肠道准备,晨起排便,且所有患者在采样前1月均未用过抗生素、微生态活菌制剂及聚乙二醇等导泻剂.正常人群采样前无消化道疾病、腹泻及肝胆胰疾病史,亦无以上药物使用史. 1.2 kv培养基 (1)培养基:(1)厌氧培养基:TPY培养基,MRSA培养基,KV培养基;(2)需氧培养基:EMB培养基,PZ培养基.(2)仪器和设备:Ⅱ级生物安全柜、37℃普通培养箱、Micro Scan Walk Away-40鉴定与药敏测试系统. 1.3 菌株的培养和接种 取适量新鲜粪便,30 min内送检.称取0.1 g的粪便于EP管中,加入0.9 mL生理盐水,系列倍比稀释,各稀释度取0.05 m L用接种环分别接种至选择性培养基平板上,进行初次分离培养.需氧菌37℃培养18~24 h,厌氧菌37.5℃厌氧培养24~48 h,如无菌生长,继续培养至1周.然后对厌氧菌挑取少许菌落做二次传代厌氧培养.最后分别对各菌株进行鉴定并按平板活菌计数法计数.菌群平板活菌计数法:根据平板菌落计数和稀释度,每克标本中活菌集落单位计算公式: 结果以每克粪便量中菌落形成单位的对数值表示. 接种前,涂片观察菌株的纯度、革兰氏染色反应和菌落形态.然后将菌株接种入3 m L接种液(经高压消毒的去离子水),制成至少相当于McFarland 3标准液但不高于McFarland 5标准液的浑浊悬浊液.接着,按不同要求向鉴定板每个含有底物的孔和两个对照孔中加入50μL细菌悬液.然后将已接种的鉴定板在Micro Scan Walk Away-40鉴定与药敏测试系统中,35℃~37℃的条件下孵育4 h.读取鉴定板,记录所有底物的结果,并与相应细菌数据库进行对比. 1.5 统计方法 进行SPSS统计分析,文中计量资料采用均数标准差表示,采用独立样本t检验,P0.05为差异有统计学意义. 2 各组大肠杆菌、粪肠霉菌计数比较 正常人对照组与大肠癌患者组比较结果:大肠癌患者组大肠杆菌、粪肠球菌计数显著增加;双岐杆菌,乳酸杆菌、类杆菌(弯曲杆菌)计数显著减少.根据文献报道,菌群失调按标准判定为:Ⅲ度菌群失调,见表1. 3 肠道菌群的确定 现代医学研究发现,人体肠道中,厌氧菌都比需氧菌在数量上多得多.过去认为粪便中含有大量的大肠杆菌(需氧菌),现在发现粪便中厌氧菌比需氧菌多1 000~10 000倍.1957年,“厌氧菌占绝对优势”的概念建立.在结肠中厌氧菌:需氧菌比例是3 000:1,人们携带巨大数量的细菌(尤其是厌氧菌)对健康当然有好的作用,也会有坏的作用,一般正常情况下还是以好的有益作用为主,只在人体异常情况下才发生致病作用.有学者证实,不论是婴儿还是成人,肠道中均以厌氧菌主要是双歧杆菌和类杆菌占绝对优势(95%以上),而需氧菌或兼性厌氧菌,如大肠杆菌、肠球菌等总数相加也不超过5%. 本研究所使用稀释性平板活菌计数法,不是所有稀释度都要进行接种,而是只选择易计数的稀释度进行接种.通过对培养结果的多次观察和分析,得出经验:在10-1、10-2、10-3这3个稀释度进行接种后菌落生长得比较密集,很难计数;而在10-7、10-8、10-9这3个稀释度进行接种后几乎不长任何菌落.所以,培养双歧杆菌、乳酸杆菌和类杆菌可以选择10-4、10-5、10-6个稀释度进行接种,培养大肠杆菌可以选择10-3、10-4个稀释度进行接种,培养肠球菌可以选择10-4、l0-5稀释度进行接种. 这次研究对肠道菌群进行了定性、定量分析,在获得肠道菌群正常参考值的同时,也发现随着年龄的增长,老年人肠道内双歧杆菌、乳酸杆菌、类杆菌等厌氧菌数量明显减少,肠杆菌和肠球菌数量明显增加.这一分析结果充分反映了肠道的定植抗力,说明老年人的肠道对病原菌的抗力降低,易引起疾病.而且,随着我国经济发展,大肠癌发病率的逐年升高.目前已证明大肠癌与饮食习惯导致的肠道内环境改变密切相关,而肠道菌群又是构成肠道内环境的重要因素.本研究发现大肠癌患者大肠杆菌数量显著增加,双岐杆菌、乳酸杆菌、类杆菌等厌氧菌数量显著减少,厌氧菌和需氧菌的数量比例明显倒置.可能的原因:(1)大肠癌患者因年老肠道机能病变,肠蠕动吸收功能下降导致肠道内环境改变,需氧菌数目升高,厌氧菌数目降低.(