实验1大肠杆菌的分离和培养.pptVIP

第一部分 微生物的利用 微生物：是指结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物，如酵母菌、细菌、放线菌、霉菌、蓝细菌和病毒等。 绝大多数微生物与传染病无关，90%以上的微生物是对人类有益的。 微生物有多种用途，许多抗生素来源于放线菌和霉菌；有些食品由微生物发酵制成，如酒由酵母发酵产生，腐乳由红曲霉和毛霉发酵制成。 本文档共31页；当前第1页；编辑于星期二\1点16分 实验1 大肠杆菌的培养和分离 基本要求 1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。 2.进行大肠杆菌的分离，用固体平面培养基进行细菌的培养。 本文档共31页；当前第2页；编辑于星期二\1点16分 一、大肠杆菌 革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌 在肠道中一般对人无害 但也有一些菌株对人体是有害的，可侵袭肠粘膜并产生毒素 任何大肠杆菌如果进入人的泌尿系统，都会对人体产生危害。 本文档共31页；当前第3页；编辑于星期二\1点16分 结晶紫 碘液 95%乙醇 革兰氏染色法 1min 革兰阳性 革兰阴性 1min 脱色 复染 本文档共31页；当前第4页；编辑于星期二\1点16分 菌落（colony）：一个细菌细胞在固体培养基上发展成一个肉眼可见，具一定形态结构的子细胞群。 光滑型菌落 粗糙型菌落 本文档共31页；当前第5页；编辑于星期二\1点16分 本文档共31页；当前第6页；编辑于星期二\1点16分 二、细菌的培养和分离 1、实验仪器设备： 移液枪 本文档共31页；当前第7页；编辑于星期二\1点16分 接种环 玻璃刮刀 本文档共31页；当前第8页；编辑于星期二\1点16分 超净工作台 （保证 无菌环境） 本文档共31页；当前第9页；编辑于星期二\1点16分 高压蒸汽灭菌锅 本文档共31页；当前第10页；编辑于星期二\1点16分 恒温培养箱 本文档共31页；当前第11页；编辑于星期二\1点16分 摇 床 本文档共31页；当前第12页；编辑于星期二\1点16分 2、培养基： 平板 斜面 固体培养基 LB培养基： 蛋白胨：0.5g 酵母提取物：0.25g NaCl:0.5g H2O:50mL 琼脂：1g 液体培养基 固体培养基 调pH值 本文档共31页；当前第13页；编辑于星期二\1点16分 菌膜 菌沉淀 均匀浑浊 对照 液体培养基（培养液） 本文档共31页；当前第14页；编辑于星期二\1点16分 3、实验步骤： （1）培养基、培养皿灭菌 ——高压蒸汽灭菌法 将配制好的50ml LB液体和固体培养基 分别装入250ml 三角瓶中，加上封口膜； 将培养皿用牛皮纸包好； 置于灭菌锅内1kg压力灭菌15min （121℃） 本文档共31页；当前第15页；编辑于星期二\1点16分 无菌技术 最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。 有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞（不能用脱脂棉：易吸水引起后引起污染），也可采用各种金属、塑料、封口膜及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。 （160 ℃ 2h或170 ℃ 1h） 本文档共31页；当前第16页；编辑于星期二\1点16分 高压蒸汽灭菌法：玻璃器皿、金属、移液枪头等 （火焰）灼烧：接种环、试管口、三角烧瓶口 紫外灯+过滤风：超净台灭菌 消毒：70%酒精棉球 （消毒：利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。） 本文档共31页；当前第17页；编辑于星期二\1点16分 （2）倒平板 灭菌后，待灭菌锅压力与大气压力相同时打开锅盖 将有培养基的三角瓶和培养皿放到超净台上 打开超净台的紫外灯和过滤风，待固体培养基冷却到60℃时，关闭紫外灯 用酒精棉球消毒桌面和手。 本文档共31页；当前第18页；编辑于星期二\1点16分 倒平板： 10-12ml培养基/培养皿每倒入一个后立即置于水平位置上，轻轻晃动，使培养基铺满平皿底部，待凝，并形成平面。 酒精灯旁： 左手？右手？ 本文档共31页；当前第19页；编辑于星期二\1点16分 制作试管斜面： 将配制好的呈熔化状态的培养基转移到试管中时必须用三角漏斗 灭菌试管冷却到50℃左右， 把试管棉塞一端搁在玻棒上， 待冷凝后即成试管斜面 将分装好的含培养基的试管灭菌 P21小字部分 本文档共31页；当前第20页；编辑于星期二\1点16分 1/3在试管外， 2/3在试管内 正确 不