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大环内酯类抗生素药物检测方法的研究进展 1 大环内酯类抗生素 在含有14、15或16元的大环内酯分子中，它被称为黄鼠狼能聚合起来。14、15或16元。属中谱抗生素, 主要有红霉素 (erythromycin, ERY) 、罗红霉素 (roxthromycin, ROX) 、竹桃霉素 (olcandomycin, OLC) 、螺旋霉素 (spiramycin, SPI) 、泰乐菌素 (tylosin, TYL) 、替米考星 (timicosin, TIM) 、交沙霉素 (josamycin, JOS) 等。这类药物化学结构相似, 作用也比较相似。其结构图见图1。大环内酯类抗生素对于革兰氏阳性菌、支原体以及部分革兰氏阴性菌有良好的抑制和杀灭作用, 主要是通过作用于50s核糖体抑制其蛋白质的合成起作用, 另外还具有毒性低的特点;应用于临床可治疗敏感菌引起的呼吸道、消化道和泌尿生殖系统的感染。但是, 长期使用这类抗生素, 细菌较易产生耐药性。抗生素及其代谢物将在动物组织和器官内蓄积, 达到一定浓度后, 可造成前庭和耳蜗神经的损害, 导致眩晕和听力减退, 严重者造成肝肾的严重损害。人体食用抗生素残留量超标的水产品或其他动物源性食品后可能引起过敏反应, 使人体肠道菌群失调, 还会导致携带耐药因子的菌株扩散。 欧盟对动物性食品中的大环内酯类抗生素的残留提出标准要求, 不同的抗生素在动物肌肉中的残留量有所不同:红霉素为200μg/kg, 替米考星为50μg/kg, 泰乐菌素为100μg/kg。日本肯定列表中规定水产品中的红霉素残留量鲈形目为60μg/kg, 其他鱼贝类为200μg/kg, 替米考星为50μg/kg, 交沙霉素为50μg/kg, 泰乐菌素为40μg/kg, 竹桃霉素为50μg/kg, 螺旋霉素为200μg/kg。我国农业部也发布了《动物性食品中兽药最高残留限量》的235号公告, 规定在动物肌肉中红霉素残留量为200μg/kg;吉他霉素为200μg/kg;替米考星为100μg/kg;泰乐菌素为200μg/kg。 大环内酯类抗生素药物在养殖业中的应用较为普遍。然而近年来多起抗生素药物残留超标事件使得水产等动物性食品的安全遭到了质疑。各国制定的动物性食品中各种药物残留限量标准要求, 对我国水产品进出口造成了一定的影响, 也对我国水产养殖产品的药物残留检测提出了更高的要求。因此, 探讨适合的、快速灵敏的检测方法, 使之达到低检测限的要求, 是当务之急。 2 一些大环内酯类抗生素残留检测方法 2.1 顺利进行分析 样品前处理是检测药物残留非常关键的步骤, 主要是通过对样品中待测物的提取、净化, 除去干扰物质, 使后续的分析测定能顺利进行。水产品中由于蛋白质、脂肪及内源性杂质等干扰物质比较多, 试样的前处理就显得尤为重要。但是, 大环内酯类抗生素具有弱碱性、脂溶性、酸不稳定性, 前处理时对于不同的水产品就需根据其残留量的多少和试样本身物性的差别区别对待, 以达到最佳的检测效果。 2.1.1 样品的提取回收率 被检药物分离、提取最重要的是选择合适的提取剂, 目前常用的提取剂有偏磷酸、偏磷酸-甲醇、甲醇、Tris缓冲液、氯仿、乙腈、三氟乙酸 (TCA) 等, 各有优缺点。 Mineo等采用10%的TCA提取畜禽肉中5种大环内酯类抗生素, 回收率可达到82%以上。Horie等用0.3%偏磷酸-甲醇 (7∶3, v/v) 提取肉类中的交沙霉素、柱晶白霉素、米罗萨霉素和螺旋霉素残留, 检测限为50μg/kg, 在1.0μg/g添加水平下, 回收率70.8%～90.4%。采用该法提取回收率较高, 但偏磷酸毒性较大, 对液相色谱仪也会有损害。Juhel-Gaugain等用乙腈提取肌肉中的大环内酯抗生素, 检测替米考星、泰乐霉素、螺旋霉素及其主要代谢产物残留, 平均回收率分别为替米考星60%、泰乐霉素63.5%、螺旋霉素51%和新螺旋霉素42%。Nagata等也采用乙腈提取动物肌肉中的14种β-内酰胺和大环内酯类抗生素, 在100μg/kg添加水平下, 回收率为63%, 定量检测限40μg/kg, 可见乙腈提取回收率比较低。Dubois等建立了HPLC-MS-MS法检测各种组织 (肌肉、肾脏、肝脏) 中同样的5种大环内酯类抗生素残留, 采用pH值10.5 Tris缓冲液作为抽提液, 钨酸钠沉淀去除药物提取液中的蛋白, 回收率为80%～110%。Jung-Bin Lee等采用甲醇、正丁醇和乙醇进行提取, 泰乐菌素、红霉素和螺旋霉素的回收率达到89%～95.5%。 大环内酯类药物结构类似, 尽管个体有细微差别, 但是该类药物为弱碱性化合物, 易溶于甲醇、乙腈、氯仿、乙酸乙酯等有机溶剂, 在酸性水溶液中也有相当的溶解度。因此, 从上述的针对几种大环内酯类药物的