二角山羊草1bl1rs型小麦雄性不育系的花药制剂发育细胞学研究.docxVIP

二角山羊草1bl1rs型小麦雄性不育系的花药制剂发育细胞学研究 许多科学家在改进后的时期研究了sv和b2小麦细胞的雄性不育性系统的失败、小菌株的发生、棉花臂的发育，并认为改良后的花粉粒育种主要发生在单带花粉粒的后期，导致失败的形态变化始于液泡膜。花粉粒的失败与单带花粉粒期间核细胞和去除螺母中的ap酶活性无关。粘型不育系花粉粒败育主要发生在二细胞后期和三细胞时期。败育发生的形态学变化从线粒体开始。花粉粒败育与花粉粒内壁的结构异常密切相关。刘春光等认为D2型小麦细胞质雄性不育系败育时期为单核中晚期至二核期,细胞质、核均异常,花粉壁薄,花粉粒皱缩扁瘪,严重凹陷,大部分有淀粉积累,表现为园败。 1BL/1RS易位型二角山羊草(Ae. bicornis)细胞质的雄性不育系,具有SV类细胞质雄性不育系的特点,具有易保持、易恢复、扬花期花药外露且种子饱满的突出特点,也存在不育系及其F1都产生一定频率的单倍体及育性恢复性变异较大等问题。本研究发现二角山羊草细胞质同时也可与其它的染色体互作产生雄性不育,表现为育性彻底、扬花期花药不外露、不产生单倍体等特点,有必要对其细胞学机制进行研究,比较其与提型、SV和D2型小麦细胞质雄性不育系在败育时期、小孢子发生过程及花药壁发育的差异,为进一步研究小麦细胞质雄性不育的机理和利用二角山羊草细胞质的雄性不育系提供依据。 1 材料和方法 1.1 ms/ms-v125及其对应保持系 1BL/1RS 不育系ms(Ae. bicornis)-5-1,非1BL/1RS不育系ms(Ae.bicornis)- V9125及其对应保持系。 1.2 方法 1.2.1 幼穗染色体的排列 取减数分裂期幼穗,用卡诺固定液(95%乙醇∶三氯甲烷∶冰乙酸=6∶3∶1) 固定,1%~2%的醋酸洋红染色压片。 1.2.2 ny液石蜡染色 2003年4~5月,旗叶抽出止花期,采幼穗经Carnoy液(冰乙酸∶95%酒精=1∶3)固定1 d后,转入70%酒精置4℃保存。采用常规石蜡制片法制片,铁矾-苏木精染色。三核花粉粒采用醋酸洋红染色。 2 结果与分析 2.1 msae.bicornis-5-1的减数分裂中期染色体配对 通过比较二角型同质异核不育系ms(Ae. bicornis)-5-1和ms(Ae.bicornis)- V9125和保持系5-1的减数分裂过程,保持系5-1减数分裂中期Ⅰ单价体为8.5%, ms(Ae. bicornis)-5-1的减数分裂中期Ⅰ染色体配对比较正常,出现单价体的频率为10.2%。保持系V9125减数分裂中期Ⅰ单价体为9.8%,减数分裂中期Ⅰ染色体配对比较正常,而ms(Ae.bicornis)- V9125减数分裂中期Ⅰ染色体配对较差,出现单价体的频率为50.5%,且在减数分裂后期Ⅰ出现较高频率的落后染色体和在四分体时期出现多分体(图1~6)。这说明ms(Ae. bicornis)-5-1雄性不育是从减数分裂以后开始的,而ms(Ae.bicornis)- V9125雄性不育从减数分裂时期就已经开始了。 (Ae. bicornis)- V9125. (Ae. bicornis)- V9125. 2.2 nis-5-1型花粉模型 为了进一步研究二角山羊草细胞质两种核质互作类型的差异,对BC3代的非1BL/1RS不育系ms(Ae.bicornis)-V9125与1BL/1RS 不育系ms(Ae. bicornis)-5-1的花粉败育过程进行了细胞学比较观察,发现ms(Ae. bicornis)-5-1与其保持系(图7~10)相似,大多数小孢子能够进入雄配子体发育阶段,未见药室减少现象,花药壁层的发育是正常的,中层和绒毡层发育正常并能适时解体,与粘型细胞质雄性不育相似。花粉可以发育到三核期,两个精核明显呈圆形花粉中积累了较多的内含物,表现为染 败,与碘-碘化钾着色(图11~14)。 而ms(Ae.bicornis)- V9125的突出特点是花药药室减少现象,有四室,三室,二室,甚至一室,以二室和三室较为普遍。其药室减少,有可能在花药发育早期发生,有可能药室发生合并造成的。发现有中层细胞提前或延迟解体现象,经常可以看到药室合并的过度情形,这一点与T型不育系相似,所不同的是ms(Ae.bicornis)- V9125大多数小孢子能够进入雄配子体发育阶段,花粉可以发育到三核期,呈圆球形空壳状,两个精核明显呈圆形,表现为园败,与碘-碘化钾不着色(图15~21)。 3 角山羊草细胞与小麦属的关系 Tsunewaki等采用置换回交法,将普通小麦5个种的12个不同核型导入小麦属和山羊草属35个种的细胞质中,根据形态学和用限制性内切酶对异质小麦叶绿体DNA差异的研究,将小麦属和山羊草属的36种细胞质分为B,