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不同培养基对松乳菇生长特性的影响 松草科又称松草科、松菌、冷菌、紫花蘑菇和松杉菌，属于红螺菌亚门层菌的伞菌科。亚洲、欧洲和北美洲均有分布,在我国,河北、辽宁、吉林、江苏、浙江、湖南、四川、青海和台湾等省均有分布。主要生长在松树林下,是一种很有价值的外生菌根食用真菌。其肉质细嫩,味道鲜美独特,营养丰富,又具有保健功能。该菌提取物对肉瘤-180和艾氏腹水癌有抑制作用,能产生乳菇紫素起抗菌作用。Ondrusek等从子实体中分离出神经鞘脂类物质,Guillot等,则从松乳菇中分离出外源凝集素,Bergendorff等发现子实体受伤时会产生几种倍半萜烯类物质。松乳菇被视为山中珍品,市场上十分走俏。它能与松树和云杉Picea asperata等针叶树形成菌根,增强植物防病、抗污染、抗严寒和抗干旱的能力,促进林木生长。同时可生产松乳菇,为我国林业多种经营提供新的途径,具有良好的经济效益、社会效益和生态效益。目前已报道松乳菇分布与生态特征,因有特殊的生态条件、营养方式和子实体分化发育条件,对它的研究与驯化有很大难度。为保护食用菌资源的多样性并合理开发,本文研究了松乳菇驯化及菌丝生长特性。 1 材料和方法 1.1 供试培养基 1.1.1 松乳菇子实体 6个不同地域的新鲜子实体,有2种颜色(灰绿色和橘红色)。 1.1.2 供试菌株 中南林学院微生物实验室从灰绿色子实体中分离的松乳菇菌株,编号为A1菌株。 1.1.3 组织分离供试培养基 PDA培养基(含链霉素120~150 mg·L-1)、改良的MS培养基、查氏培养基、蛋白胨培养基、酵母葡萄糖培养基。 1.1.4 生长特性测试培养基 碳源试验培养基:碳源10.0 g,硝酸铵1.0 g,硫酸镁0.5 g,磷酸氢二钾0.4 g,硫酸钾0.1 g,氯化钙0.05 g,硝酸亚铁0.02 g,琼脂20.0 g,蒸馏水1 000 mL,pH值为6.0。氮源试验培养基:将硝酸铵作为氮源2.0 g+葡萄糖20.0 g,其他同碳源试验培养基。其他测试以PDA培养基为基础培养基。 1.2 方法 1.2.1 细菌的分离 采用食用菌组织分离法,取子实体菌盖、菌盖和菌柄交接处、菌柄、菌柄中心等4个不同部位组织,置于不同分离培养基上,于27 ℃恒温培养。 1.2.2 无碳源培养基 将试验培养基中的碳源分别以葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、淀粉和糊精代替,作不同的碳源培养基,另设一无碳源的培养基,试验设计8×3(处理×重复)。然后接入等量松乳菇菌块,再把接种后的培养皿放在27 ℃恒温培养15 d,测定接种点菌落直径。 1.2.3 培养基的制备 分别以硝酸钠、硝酸钾、草酸铵、硫酸铵、亚硝酸、尿素、甘氨酸、蛋白胨和酵母浸出汁为氮源作不同氮源的培养基,另设一无氮源的培养基,10个处理。每个处理重复3次。接种量及培养条件同碳源试验。 1.2.4 平均重复的处理次数 采用PDA培养基,培养基中氯化钠质量浓度分别为0 g·L-1,2 g·L-1,4 g·L-1,6 g·L-1,8 g·L-1,10 g·L-1,12 g·L-1,14 g·L-1,共8个处理,每个处理重复3次。接种量及培养条件同碳源试验。 1.2.5 温度4:5个培养组,10,10,10,10,10,7,7,7,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32,32, 采用PDA平板,接种同龄定量的一级松乳菇菌块后,恒温于5 ℃,7 ℃,10 ℃,12 ℃,15 ℃,17 ℃,20 ℃,22 ℃,25 ℃,27 ℃,30 ℃,32 ℃,35 ℃,37 ℃和40 ℃下培养。每个温度处理3个重复。培养15 d后测定接种点菌落直径。 1.2.6 moolnaoh准确调节培养基的ph 以PD