花生粉红中多酚类物质的提取工艺及抗氧化活性研究.docxVIP

花生粉红中多酚类物质的提取工艺及抗氧化活性研究 在色彩丰富的情况下，有许多酚类化合物，具有抗逆等生物活性。但在花生加工业中,花生红衣仍作为一种经济效益很低的副产品存在,没有得到充分的综合利用。花生红衣中多酚类物质的含量很高,但现有报道的提取方法如热回流等方法不仅提取不完全,而且耗时长,溶剂浪费严重。而选用超声波辅助提取技术,不仅可以缩短反应的时间,而且提高了提取率。 本实验拟用超声辅助乙醇提取花生红衣多酚类物质(peanut te sta polyphe nols,PTP)的工艺,并对大孔树脂纯化后的花生红衣醇提物进行还原力及油脂氧化诱导时间等抗氧化活性的测定,旨在为花生红衣的综合利用提供一定参考。 1 材料和方法 1.1 化学试剂及仪器 鲁花大花生红衣由山东鲁花公司提供,将其粉碎过4 0目筛,备用。 Folin-酚试剂;GA(没食子酸标准品)、Trolox(VE水溶性衍生物)、BHA(叔丁基羟基茴香醚)Sigma-Aldrich公司;无水乙醇山东莱阳市双双化工有限公司;VC天津市医药工业技术研究所;铁氰化钾国药集团化学试剂有限公司。以上试剂均为分析纯。 JY92-Ⅱ超声波细胞粉碎机宁波新芝生物科技股份有限公司;UV-9200紫外分光光度计北京瑞利分析仪器公司;743型Rancimat仪瑞士万通公司;AB104-N电子分析天平梅特勒-托利多仪器有限公司。 1.2 方法 1.2.1 多酚含量测定 1.2.1. 碳酸钠标准使用液 用5mL乙醇溶解0.25g没食子酸标准品,用去离子水定容至50mL。分别移取0、0.5、1.0、1.5、2.5、5.0mL没食子酸溶液到50mL容量瓶中,用去离子水定容,配制成质量浓度为0、50、100、150、250、500mg/L的没食子酸标准溶液。从上述不同质量浓度的没食子酸标准溶液中分别移取0.5mL,加入到50m L容量瓶中,再分别加入30mL去离子水,混合。加入2.5mL Folin-酚试剂,混合。在0.5~8min内加入7.5mL质量分数20%的碳酸钠溶液,混合,用去离子水定容。将上述标准溶液在20℃放置2h后,用紫外分光光度计进行全波长扫描,在最大吸收峰下测定吸光度,以没食子酸标准品溶液质量浓度为横坐标,吸光度为纵坐标绘制标准曲线,得回归线性方程:Y=0.0012x+0.0054,相关系数R2=0.9996(图1)。 1.2.1. 单因素试验 称取2.0g花生红衣粉末置于烧杯中,加入乙醇溶液,在超声波辅助提取条件下,分别对料液比、乙醇溶液体积分数、超声时间和超声功率进行单因素试验。离心,取上清液在旋转蒸发仪上蒸至原体积的1/10左右。经AB-8大孔树脂纯化后,在冷冻干燥机中冷冻干燥(纯化后花生红衣中多酚含量为64.8%),备用。按照标准曲线的测定方法测定其吸光度,根据标准曲线计算多酚的含量。 1.2.2 关于抗疲劳性能的研究 1.2.2. 还原能力测定 取不同质量浓度的样液2.5mL于试管中,依次加入2.5mL 0.2mol/L磷酸盐缓冲溶液(pH6.6)和2.5mL 1mg/100mL氰合铁酸钾溶液,50℃水浴中保温20min,快速冷却后加入2.5mL体积分数10%的醋酸溶液,离心,取上清液2.5mL,依次加入2.5mL蒸馏水,0.5mL 0.1mg/100mL三氯化铁溶液,充分混匀。静止10min后,在700nm波长处测其吸光度,以吸光度表示还原能力,吸光度越大还原力越强。以蒸馏水为空白对照,用相同质量浓度的VC溶液作还原能力的对比实验。 1.2.2. 抗氧化稳定性测定 准确称取3.0g猪油,配制不同质量浓度的PTP溶液,用Rancimat仪在105℃条件下测定其诱导时间,诱导时间越长,说明油样抗氧化稳定性越好。选取抗氧化性最优的PTP溶液与同质量浓度VC、BHT、没食子酸溶液在105℃对猪油的诱导时间做抗氧化性对比实验。 2 结果与分析 2.1 影响ptp含量的因素 2.1.1 单因素试验的结果 2.1.1. 超声功率的提取 固定超声时间15min、料液比1:12(花生红衣粉末:乙醇溶液,g/mL)、体积分数70%的乙醇溶液,分别用40、120、200、280、360、440、520 W的超声功率提取PT中的多酚。图2表明:随超声功率的增加,提取液中多酚含量不断增加,当超声功率达到280W时,多酚的提取率达到了最大值,说明此时多酚已提取完全,因此,最佳超声功率为280 W。 2.1.1. 超声时间对多酚提取的影响 固定超声功率320W、料液比1:12(g/mL)、体积分数7 0%的乙醇溶液,分别用5、10、15、20、25、30min的超声时间提取PT中的多酚。图3表明:随超声时间的增加,提取液中多酚含量不断增大;当超声时间达到15min后,多酚的提取率达到了最大值;之后随时间的增