藿香正气软胶囊对大鼠肢体缺血再灌注后肠黏膜屏障的影响.docxVIP

藿香正气软胶囊对大鼠肢体缺血再灌注后肠黏膜屏障的影响 香正气胶囊起源于宋代太平惠民和菊花的香正气散。它现在广泛用于现代医学的胃肠感染和慢性腹泻。在前期的研究中,笔者通过观察藿香正气软胶囊(HXZQ)对肢体缺血-再灌注大鼠血浆二胺氧化酶(DAO)活性、血清肿瘤坏死因子(TNF-α)及肠黏膜上皮细胞细胞膜流动性的影响,表明其对肠屏障功能具有保护作用。在此基础上,笔者进一步观察了藿香正气软胶囊对肠组织超微结构、肠黏液分泌量、肠壁肥大细胞数以及血清一氧化氮(NO)浓度的影响,以期更全面的揭示藿香正气软胶囊对肠屏障功能保护作用的机制。 1 材料表面 1.1 动物 Wistar大鼠50只,雌雄不限;平均体重(250±20) g,购自军事医学科学院四所。大鼠适应性平衡饲养1周后用于实验。 1.2 试剂 一氧化氮试剂盒由南京建成生物工程研究所(批号出品。 1.3 制备 藿香正气软胶囊有效提取物由中新药业天津达仁堂制药厂提供,批号021022。按比例用0.1%羧甲基纤维素钠溶液稀释。 1.4 透射电镜设备 OLYMPUS,BX-60光学显微镜,日本;北航医学图象处理系统,北京;OLYMPUS-VSP-3显微照相系统,日本;透射电镜JEM-100SX,由JEOL(日本)生产; UV-Vis8500 型紫外分光光度计,上海;Centrifuge 5810R型Eppendorf 低温高速离心机,德国。 2 模型建立与观察 2.1模型制备 肢体缺血再灌注模型采用改良的Yassin 法进行造模。所有大鼠进行腹腔注射麻醉。中药组及模型组麻醉后用橡皮筋结扎大鼠大腿(300 g拉力),使其缺血时间3 h后松开,再灌注18 h成模。 2.2给药与分组 造模前将实验动物随机分为5组,每组10只。中药组分为HXZQ低、中、高3个剂量组,用量分别为0.455,0.890,1.335 g·kg-1体重(相当于临床用量的10,20,30倍);模型组及正常组。每次灌胃2 mL,每日1次。模型组及正常组给予等量蒸馏水,各组连续灌胃5 d。于实验开始第6天,将模型组及中药组进行肢体缺血与再灌注。正常对照组不作任何处理。 2.3光镜标本制备 再灌注后18 h,大鼠断头处死。在距回肠末端2 cm处切取肠组织,将所取组织纵行剖开,浸入10%中性福尔马林固定,脱水,石蜡包埋等程序后,进行特殊染色。 2.4黏液染色与结果判断 以阿尔辛蓝过碘酸雪夫反应(AB-PAS)染色法显示肠黏膜表层黏液。应用图象分析系统,在低倍镜视野下(×100)每一检体随机计测5个视野内黏液物质面积,计算平均数。由此计算黏液的面积密度(Aa%),(黏液物质面积之和与单位面积之比的百分数),每组各10例。 2.5肥大细胞的染色与结果判断 将回肠末端组织切片,60 ℃烤箱内烘干8 h。以甲苯胺蓝改良法显示胞核呈蓝色,胞质呈紫红色肥大细胞颗粒。应用图象分析系统,于高倍镜视野下(×400),每例检体随机计数10个视野内肥大细胞数。求取平均值作为每例检体肥大细胞个数,每组各10例,计数结果以个数/视野表示。 2.6电镜标本制备及观察 每组随机取2例,摘取距回肠末端1 mm3肠组织,常规固定、脱水、树脂包埋切片,于JEM-100SX透射电镜下观察。 2.7血清NO浓度测定 采用硝酸还原酶法,具体操作按试剂盒说明书进行。 2.8统计学处理 采用Statview统计软件,结果以xˉ±sxˉ±s表示。多组间样本均数比较采用方差分析。 3 结果 3.1 肢体缺损-再灌注肠组织权的变化 图1显示,光镜下与正常对照组相比,模型组因肢体缺血-再灌注肠组织黏液含量明显减少(P0.01)。而藿香正气软胶囊中、高 浓度组黏液含量明显增高(P0.01)。见表1。 3.2 肥大细胞数及肥大细胞数 图2显示,模型组肥大细胞数与正常对照组比较明显增高(P0.01),藿香正气软胶囊高浓度组肥大细胞数与模型组比较显著减少(P0.01)。见表1。 3.3 粗面质网组织扩张 模型组微绒毛排列不整,并大量脱落;大量视野可见线粒体肿胀、扩张,嵴减少、断裂、消失,甚至呈空泡状。高尔基体层数减少,体积缩小。粗面内质网扩张呈池状或囊泡变,胞质面附着的多聚核糖体脱颗粒;藿香正气软胶囊高浓度组上皮细胞超微结构与正常组相近,微绒毛排列整齐、线粒体、粗面内质网肿胀、扩张明显改善。 3.4 升降p0.0.1 与正常组比较,模型组血清NO浓度显著升高(P0.01);而藿香正气软胶囊中、高浓度组血清NO浓度较模型组降低,差异有显著性(P0.01)。见表1。 4 hxzq对肠屏障功能的保护作用 肠黏膜表面的黏液具有润滑作用,同时还可阻止致病菌对黏膜的损伤,起到对黏膜防御性保护作用。为此通过特殊染色及面积密度测定对黏液含量进行对比观察。结果显示,缺血再灌注导致的黏膜损