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痛泻要方对内脏高敏感性肠易激综合征模型大鼠的疗效和电生理指标影响 肠压综合征（ibs）是一种功能肠疾病，以腹痛或腹部不适以及排便习惯的改变为特征。其发病机制复杂，包括精神、营养、个人素质等方面。单一药物的临床功能有限，不能满足临床要求。祖国传统医学亦认为,腹痛泄泻成因复杂,治法也多。痛泻要方由白术Rhizoma Atractylodis Macrocephalae、白芍Radix Paeoniae Alba、陈皮Pericarpium Citri Reticulatae和防风Saposhnikovia divaricata(Turcz.) Schischk. 组成,为《丹溪心法》所载的名方,其所治痛泻,是由脾虚肝旺、肝气乘脾、升降失常而致,所谓“土虚木贼”之证,适用于 IBS 的治疗。本研究通过对 IBS 模型大鼠行为学和电生理指标、血生化指标的观察,探讨痛泻要方对 IBS 的疗效和作用机制,为发挥中药名方多途径、多靶点及整体治疗的优势,科学开发利用中药名方提供科学依据。 1 材料表面 1.1 降钙素的合成 痛泻要方各药材由河北医科大学中医院提供,经河北医科大学生药教研室鉴定为正品。痛泻要方由河北医科大学中医院中药制剂科制备,该方由炒白术 90 g、白芍 (炒) 60 g、陈皮 (炒) 45 g、防风 60 g 组成,按处方比例取一定量的药材,按照 1∶10 加入清水煎煮,煮沸 30 min 后滤过,取上清液,再按 1∶5 加入清水,煮沸 30 min 后,滤过,取上清液,将两次所得的上清液混合搅匀,用水浴浓缩至所需浓度。低剂量含生药 1.5 g/mL,高剂量含生药 3 g/mL,4 ℃ 冰箱中保存备用。匹维溴铵片 (得舒特片),法国苏威制药生产,批号用法:碾碎后溶于蒸馏水,质量浓度 165 mg/mL。降钙素基因相关肽 (CGRP)、P 物质 (SP) 放免试剂盒,北京晶美生物工程有限公司提供。酸性正丁醇、正庚烷、OPT 溶液、半胱氨酸为 Sigma 公司提供。 1.2 ikro32r低温离心检测仪器 FMJ—182 型放射免疫γ计数器 (上海原子核研究所日环仪器厂产);海尔牌 BCD—286H 低温冰箱 (-70 ℃);德国产 MIKRO22R 低温离心机;PowerLab 记录分析仪 [PowerLab/8sp (AD Instruments software) 澳大利亚] 及 ML132 生物电放大器;银制双极电极购自上海诺城电气有限公司;动脉栓子清除术导管 (6F,气囊长 2 cm,直径 2 mm Fogarty, Edwards) 购自上海惠尔科技发展有限公司;连续硬膜外导管 (3F);0.5% 醋酸 (pH值4)。 1.3 动物驱动动物:男性,体重,年龄及动物浚定号 清洁级新生 SD 大鼠 75 只,雌雄各半,体重 (11±2) g,年龄 8 d,由河北医科大学实验动物中心提供,动物合格证号:040136。 2 大鼠肠道扩张及肌电活动评估 2.1 IBS 模型的建立:采用醋酸结肠慢性刺激法制备肠道高敏感性的 IBS 大鼠模型。新生 SD 大鼠每 10 只与其母鼠共同饲养在同一笼内,发育至 25 d 后,将母鼠与幼鼠分离。分离后的大鼠每4只一笼,给予足够的食物和水分。直肠刺激:新生大鼠从第8天开始,在 8~21 d,每天给予直肠内醋酸刺激,即将石蜡油润滑后的连续硬膜外导管 (直径 1 mm) 经肛门插入 2 cm,注入 0.5% 醋酸 0.5 mL;在2周内,新生大鼠与母鼠一起生活。从第21天后的2周内,不进行任何实验操作。 肠道敏感性评估:①评估大鼠的腹部回缩反射 (AWR);②记录腹壁肌电活动评估肠道敏感性。均按文献方法进行。 肠道敏感性评估:上述新生期大鼠在刺激停止2周后,评估其肠道敏感性。评估大鼠的 AWR:乙醚麻醉下,将石蜡油润滑后的动脉栓子清除术导管经肛门插入,气囊末端距离肛门 1 cm,用胶布把导管和大鼠尾巴根部缠在一起,固定气囊。大鼠苏醒后,将其放在特制的透明塑料笼 (20 cm×6 cm×8 cm) 内,大鼠在此笼内只能前后运动,不能转身。30 min 后待大鼠适应环境后,逐渐注水扩张肠道,分别观察引起大鼠腹部抬起以及背部拱起的容量阈值,进行行为评估。每次直肠扩张持续 20 s。为得到准确的评估结果,对每一阈值都重复进行3次扩张,数据取均值。气囊容量与直径的对应关系:0 mL 容量对应于 2 mm 直径;0.5 mL 对应于 8.5 mm;0.8 mL 对应于 10.9 mm;1.2 mL 对应于 12.2 mm;1.6 mL 对应于 13.5 mm。 记录腹壁肌电活动评估肠道敏感性:将发育至3个月的大鼠用苯巴比妥 (30 mg/kg) 麻醉,将一银制双极电极缝合到腹股沟韧带