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a类碳青霉烯酶的生物信息学分析 碳青霉属具有广泛的抗菌活性。由于它能承受大多数-内酰胺酶的水解，因此它经常被用来生产超广谱-内酰胺酶（esbl）和阴道c-内酰胺酶（mccl）引起的严重感染的治疗。但碳青霉烯耐药肠杆菌的出现,给临床治疗带来了极大困难。通常,革兰阴性菌对碳青霉烯类的耐药机制,一是Amp C酶过度表达联合OMP丢失;二是PBP对碳青霉烯类亲和力的改变;三是碳青霉烯酶(Carbapenemases)的产生[1~3]。在这些机制中,最突出的是碳青霉烯酶,它包括Ambler分类的A、B和D三类酶。本文主要针对A类碳青霉烯酶的种类与分布、生化特性和构效关系等问题进行综述。 1 ges,kpc和imi-2,3e,2f-m 自从20年多前发现第一个A类碳青霉烯酶以来,至今已发现6群不同的酶,包括GES、KPC、SME、IMI/NMC-A、SHV-38和SFC-1,其中GES、KPC和IMI-2由质粒编码,其他均由染色体介导。依据Bush-J-M分类系统,这些酶分为4个不同的表型亚群,即2br、2be、2e和2f亚群。与其他A类β-内酰胺酶一样,A类碳青霉烯酶利用活性位点丝氨酸残基灭活β-内酰胺类药物,可水解青霉素类、头孢菌素类、单酰胺类和碳青霉烯类,这种活性可被克拉维酸和他唑巴坦所抑制,但对EDTA不敏感。 1.1 u3000e-4e-pb-3和b. KPC酶(Klebsiella pneumoniae carbapenemase)由质粒介导,自从KPC-1发现于卡罗莱纳州分离的肺炎克雷伯菌以来,现已发现5个变异酶,均具有碳青霉烯酶活性,它们相互之间有1~3个氨基酸的替换)[5~7]。 尽管最初KPC-1发现于肺炎克雷伯菌,但KPC酶现已扩展到肠杆菌科的其他菌种,如大肠埃希菌、阴沟肠杆菌、产酸克雷伯菌、肠炎沙门菌和奇异变形杆菌,以及铜绿假单胞菌、恶臭假单胞菌等。产KPC酶菌株在美国东海岸快速扩展后,在全球开始出现。2005年法国报道,证明分离的产KPC-2肺炎克雷伯菌来自曾在纽约接受过治疗的病人。KPC碳青霉烯酶也发现于苏格兰(KPC-4)、哥伦比亚、以色列和中国。 自2001年以来,美国或纽约市收集于不同医院的肺炎克雷伯菌中blaKPC的阳性率逐年增高。携带blaKPC的大部分菌株在各自研究中归属于相同的核酸型。对2004年9~10月间纽约布鲁克林分离的大肠埃希菌、肠杆菌和肺炎克雷伯菌进行调查显示,大肠埃希菌和肠杆菌中未发现blaKPC基因的存在;而24%肺炎克雷伯菌具有blaKPC-2或blaKPC-3基因,且多数blaKPC携带菌株(88%)为同一核酸型。对1999~2005年收集的8885株肠杆菌科细菌调查发现,51株对亚胺培南和美罗培南的MIC升高(≥2μg/m L),其中28株肺炎克雷伯菌、2株产酸克雷伯菌、7株费劳地枸橼酸杆菌、4株肠杆菌、3株大肠埃希菌和1株黏质沙雷菌均产生KPC-2或KPC-3。2000~2001年,发生在纽约曼哈顿医院的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌暴发感染,多数菌株被发现存在遗传关系,并产生KPC-3。这些事实提示,KPC酶具有在人类致病菌中传播的潜力。 1.2 分离对ges酶的耐药表型的影响 GES(Guiana extended-spectrumβ-lactamase)酶具有ESBLs的一般特性,除blaGES-7基因位于染色体以外,其他blaGES基因均位于整合子的基因盒上。目前,GES酶家族含有9个不同的成员,其中GES-1、-2、-4、-5和-6显示对碳青霉烯酶活性,它们相互之间有1~4个氨基酸的替换。 GES酶主要分布于铜绿假单胞菌,但也见于肠杆菌科细菌如大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌;产GES碳青霉烯酶的菌株主要分布于欧洲、南非和远东等,在希腊、法国、葡萄牙、南非、法国圭亚那、巴西、阿根廷、韩国和日本均有报道。产GES碳青霉烯酶菌株多为散发感染,然而,表达GES-2的铜绿假单胞菌已在南非引起了8例病人小范围的医院暴发,产GES-5的肺炎克雷伯菌在韩国引起了6例病人的感染。1999~2001年,里斯本Santa Maria医院分离于不同病人的30株产GES-1肺炎克雷伯菌,具有相同的限制性酶切模式,有力证明这次暴发流行是由一株产GES-1肺炎克雷伯菌的扩散所致。 从临床分离菌来看,与GES酶相关的耐药表型可通过接合的方式进行传播,由此提示,携带blaGES的整合子存在于可转移质粒。但也有接合试验未获得成功的报道,例如,产GES-1菌株的耐药表型可以通过电穿孔(Electroporation)转移给受体菌,但不能通过接合的方式,该结果提示,携带blaGES-1整合子位于一个非转移性质粒;亦有携带blaGES整合子插入宿主的染色体的报道。 1.3 sme-1与lysr型调节基因的连接 SM