液相常见问题.docxVIP

液相的常有问题： 一、 在实质工作中我们常常能碰到基线的漂移的状况。对于基线漂移 或上下波 动 的原由可能有以下几种： 1、 柱子的均衡时间长。一般来说，新柱子的均衡时间要短。有些老柱子的均衡就 是时间长。自然柱子的均衡就是时间也与它使用的流动相有关系。假如使用了 离子对试剂 那么比一般的简单的流动相(比如 二元流动相 甲醇 水，乙腈 水,，，，，，) 2、 系统存在漏点。假如系统存在漏点，那么出现基线向下漂移。需要检漏 3、 PUMP头有气泡。PUMP头的气泡会致使基线的漂移与颠簸。假如思疑就是 PUPM头有气泡致使基线不稳只要要瞧仪器的压力就能否稳固就好。 4、 流动相脱气。假如流动相没有脱气，基线必定就是不稳的 5、 柱后气泡。在柱子后有气泡产生，致使检测器中的读数有颠簸。 6、 PUMP密封不好。密封不好也会致使PUMP头的气泡好象不可以能与漏夜， 基线自然不稳固了。 7、 系统的环境。仪器的使用如温度的变化 流速的变化，，，,以及梯度洗脱自然基 线漂移 8、 单向阀睹塞或污染。单向阀的睹塞与污染，能造成流量不正确 压力 颠簸。故 也会颠簸漂移 9、 检测器污染或有杂质 10、 假如就是紫外或二极管阵列检测器 (PDA),清除以上原由还出现基线噪音大， 就有可能就是氘灯的能量不足了 二、 主峰后边有好多杂质峰可能原由 1，仪器问题最有可能的就就是系统污染，特别就是管路比方进口单向阀或各接 口处等有盐残留； 色谱柱问题这个好办换新的色谱柱大多半能解决问题； 试剂试药问题：所用试剂、试药达不到色谱级别所需或许不同批号不同厂家的 东西都有可能影响最直接影响的就就是物质的纯度影响流动相的汲取；梯度洗 脱程序 梯度洗脱程序设置不合理 比方在某个时间段急巨变化；其她 如配制方 法不同 超声方法不相同。 此刻 瞧似很简单的问题，在经过很长一段时间的探索后发现 ，上述原由其实都就 是比较客观的 假如以上4点都解决不了，能够考虑以下原由 仪器自己功能上的差别 致使。比方安捷伦低压梯度与高压梯度做的相同的东西，能重复出来，并且梯度峰都 很小 甚至没有 而用岛津的低压与高压梯度仪器 所表现的就不相同了，详细原由，因 只拥有经验所得因此当前只好作为议论的一个话题仅供各位参照。 三、 冲刷液相管路 1、 假如系统污染能够考虑用异丙醇冲刷，把过滤后的异丙醇当流动相，以0、 5ml/min冲刷30-60分钟一般杂质便可消除。假如不可以能够考虑12%的磷酸冲刷， 它能够有效冲洗不锈钢与其余资料的管路消除有机杂质及污垢比用有机溶剂更 有效也比用稀硝酸有效用5-15%硝酸冲洗固然有效，但就是冲洗后系统很难平 衡特别低紫外地区)。磷酸冲洗方法以下：先用甲醇或许乙腊完全冲洗系统，而后 就是纯水而后就是12%磷酸冲刷60分钟左右冲刷过程中能够将进样器一并冲 洗 而后换用水甲醇或乙腈冲刷 这样就基本能够了。 2、 用5%硝酸洗脱管路 ^后未知峰去无踪成效不错介绍大家有必需试一试 假如不就是污染严重还就是别用硝酸洗脱管路，因硝酸对不锈钢管路伤害较大 四、 梯度洗脱 做梯度洗脱有时就是会这个样子的基线会漂移的满厉害的。要用足够的时 间来均衡假如有在线脱气装置会好一点。特别就是走梯度洗脱时后边常常有 一些杂峰而有机相在不同的比率下吸光度也不相同因为UV检测的就是相对汲取度， 因此就造成了基线漂移。并且假如柱子没有均衡好这类漂移也不相同。假如走上 两个小时后这类漂移相对就稳固。在梯度剖析时流动相的选择与波长的选择就是 很重要的在梯度洗脱时，一般波长不该再变不然再高的水平也做不好，特别在低波 长时。 剖析波长较高时流动相相对简单些如在300nm以上影响相对较小。但就是， 在大多半的状况下流动相首选低紫外汲取的如乙腊与水少用甲醇与四氢吠喃，无 机盐以磷酸盐等低紫外汲取的为好少用醋酸盐、柠檬酸等有机盐酸用磷酸与硫酸 少用醋酸同时梯度变化尽可能小与缓与固然剖析时间将增添。此外，A，B(C)相都采 纳混淆流动相以减少流动相变化对紫外的影响。还有一点所用的试剂要求为色谱 纯国内有的厂家所标的色谱纯连化学纯的都不如有一些特定的增添试剂如离子对 试剂只好使用进口的色谱纯级。注意以上几点您的梯度色谱图势必 大有改观。自然您的仪器也要好的了。 建议您使用一种方法：扣除本底法。此种方法由色谱工作站来达成，详细方法就 是：、不进样严格按梯度方法空跑出基线得出不进样的梯度基线。2、进样，做梯 度洗脱，获得谱图。3、在工作站上用谱图相减的功能办理，用谱图减去梯度基线，即 可获得比较美丽的谱图并且不影响定量计算！ 五、 样品池污染 1、 假如就是流通池脏能够把柱子去下来用50—50(v/V )的异丙醇、异丙醇纯水、 来冲刷流通池。假如还不可以，用1N的硝酸冲流通池 再用纯水冲刷。 http://ww