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黑布林皮花青素提取工艺的优化 与合成染料相比，天然染料具有高度的安全性和一定的营养性。因此,开发利用动植物天然色素资源,日益受到人们的普遍重视。黑布林营养丰富,含有丰富的糖、维生素、果酸、氨基酸等营养成分,保健功能十分突出,具有生津利尿、清肝养肝、解淤毒、清湿热等作用。黑布林皮中含有大量的花青素,而花青素是一种安全的天然食用色素,也是一种强力抗氧化剂,能促进人体生成胶原质,具有延缓衰老、抵抗肿瘤等重要生理功能。在食品工业中,利用黑布林加工饮料、果酒时,会有不少皮渣废料产生,若直接丢弃势必造成浪费,从皮渣中提取花青素是一种较好的综合利用途径。本文对黑布林皮花青素的提取工艺进行了初步研究,得到了品质较好的花青素产物,并研究了产物的光、热、食品基质、金属离子等的稳定性,为进一步对其开发利用奠定了基础。 1 材料和方法 1.1 主要仪器设备 国产黑布林,购于广东省茂名市河西水果批发市场;95%乙醇、无水乙醇、浓盐酸等试剂和药品均为分析纯。 主要仪器设备:ZF-1紫外-可见分光光度计,上海顾村电光仪器厂;9FZ-15齿爪式粉碎机,广东阳山北江机械制造有限公司。 1.2 方法 1.2.1 原材料预处理 取新鲜黑布林皮,于40 ℃烘箱中烘至水分含量低于2%,然后用粉碎机粉碎,储存粉末备用。 1.2.2 提取工艺的确定 称取一定量的黑布林皮粉于三角瓶中,加入酸性乙醇作为提取剂,在一定温度下浸提一段时间后,真空抽滤得滤液,备用。 分别考察不同提取剂种类、提取剂浓度、提取时间、提取温度、pH值、料液比、提取次数对提取率的影响。在单因素试验基础上,以乙醇浓度、提取温度、提取时间及pH为因素,按照四因素三水平设计正交试验,分别选取乙醇浓度、提取温度、提取时间、pH值进行正交试验,试验设计见表1。 1.2.3 相关激素含量测定 花青素含量的测定方法采用pH示差法,此法近年来已被证明是花青素含量定量分析的一种简便、行之有效的方法,能很好地消除溶液中杂质对测定结果的影响,可信度较高。参考冯建光等的方法,花青素的含量按公式(l)计算: TAcy(mg/100g)= (ODpH1.0?ODpH4.5)×V×n×M×100×mε(ΟDpΗ1.0-ΟDpΗ4.5)×V×n×Μ×100×mε 其中,V:提取液总体积(mL);n:稀释倍数;m:黑布林皮干粉质量(g);M:Cy-3-glu的分子量(449);ε:Cy-3-glu的消光系数,其值为29 600; 1.2.4 有糖溶剂 用紫外-可见分光光度计测定提取液最大吸收峰,将结果与参考值作比较,确定提取物是否为花青素。具体做法:称取1.0 g黑布林皮粉末,加入75%乙醇溶液40 mL(pH2.0),在80 ℃下水浴提取1 h,真空抽滤后取滤液,按波长间隔20 nm扫描提取液,测其吸收光谱。 1.2.5 稳定状况研究 花青素的稳定性在使用过程中至关重要,因此,根据花青素在实际应用中可能遇到的情况,考察其在各种环境下的稳定状况是花青素研究的主要内容。这些环境条件包括酸碱性(pH)、光、热、氧化剂、还原剂、常用食品添加剂、金属离子等。本试验根据紫外扫描所得花青素溶液的最大吸收波长,在此波长条件下测定花青素在各种环境条件下的吸光度值OD,以吸光度值的变化换算为花青素的浓度,讨论黑布林皮花青素在不同环境条件下的稳定性。 1.2.6 处理数据 利用SPSS软件进行统计分析,对试验前后及组间进行t检验,每个处理重复3次。 2 结果与讨论 2.1 黑布林皮中青石的紫外吸收特征 由图1可知,黑布林皮色素提取液在510 nm左右处出现特征吸收峰,表明本试验提取的色素具有花青素特征,属于花青素类物质。 2.2 提取时间和提取速率 试验结果采用SPSS11.5 for windows统计软件进行多重比较,差异显著水平为0.05。 由表2可知,诸因素及其交互作用对提取率大小的影响因素依次为DBAC,即提取时间pH值乙醇浓度提取温度;最优水平为A2B3C1D1,方差分析结果表明,乙醇浓度、提取温度和提取时间对提取率的影响均有显著性差异(p0.05)。综上所述,试验确定的最佳提取条件为当乙醇浓度为75%,pH 2.5,提取温度为50 ℃,提取时间为60 min时,花青素的提取率最大,为539.66 mg/100 g。 2.3 黑布林皮蓝草的稳定试验 2.3.1 ph值对黑布林皮色素提取液稳定性的影响 分别取一定浓度的黑布林皮色素提取液20 mL,分别用1 mol/L HCl和1 mol/L NaOH溶液,调节pH值,并放置30 min,观察溶液颜色变化,分析pH值对其稳定性的影响,结果见表3。 由表3可知,黑布林皮色素提取液的颜色随pH值变化而变化,符合花青素溶液随pH值的变化规律。其原因是在不同pH值下,花青素的分子结构发生改变所致。由于花青