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南方根结线虫病防治研究 根结线虫是植物根系的内生物，是我国较重要的植物根系病虫害之一。在全国绝大部分省区均有分布, 可侵染数百种作物, 其中蔬菜果树受害最为严重。近年来由于大棚蔬菜栽培的普遍推广, 南方根结线虫 (Meloidogyne incognita) 病害的发生有显著的上升和加剧, 发病田的寄主常年减产15%～20%, 严重时达到70%以上。而防治根结线虫的化学药剂常带来环境污染和人身安全等问题, 这在很大程度上限制了其使用。生物防治作为最有前途的防治手段, 已逐渐受到世人的关注。 利用植物根围促生细菌 (PGPR) 防治植物病害成为近年来研究的热点, 而在国内利用根围促生细菌防治根结线虫的研究才刚刚开始。南京农业大学植物保护学院细菌实验室自1991年以来已经筛选出了100余株PGPR菌, 并制成一系列的菌剂成功地用于蔬菜青枯病等土传病害的防治。本研究通过使用3菌混合的生防菌剂GJ23对南方根结线虫二龄幼虫和卵进行处理以及温室盆钵试验, 来评价其对根结线虫病的防治效果。 1 材料和方法 1.1 幼虫收集方法 从番茄根部挑取南方根结线虫新鲜卵块, 置于贝曼漏斗中孵化, 24 h后开始收集幼虫, 每天收集1次, 共收集7 d。线虫液稀释为含二龄幼虫100条/ml, 4 ℃保存、备用。 1.2 卵悬浮液的制备 将有根结的番茄根剪碎后放入三角瓶中, 加0.5% NaClO液100 ml, 用力摇1～2 min后, 快速倒入200～500目筛组中并用自来水冲洗10 min, 收集500目筛网中的卵, 稀释成浓度为3 000粒/ml的卵悬浮液。 1.3 gj23细菌制剂 发酵后的菌液经离心得上清液原液和菌体, 将菌体按1∶40配成含有109CFU/ml的菌悬液。 1.4 线虫活力测定 平均室温在20 ℃左右时, 分别将GJ23的菌悬液和上清液原液稀释成2倍液、5倍液和10倍液, 各吸取2 ml, 加入直径为7.5 cm的灭菌培养皿中, 然后分设2种试验:①在培养皿中再加入2 ml二龄幼虫的悬浮液, 以清水和5倍、10倍稀释的培养液作对照, 重复3次, 分别在12 h、24 h和36 h观察线虫的活力;②在培养皿中再加入2 ml根结线虫卵悬浮液, 以清水和2倍、5倍、10倍稀释的培养液作对照, 重复3次, 分别在4 d、6 d、8 d和10 d观察卵的孵化情况。 1.5 接种植株根重和冠重的测定 将供试番茄品种播种于灭菌土中, 出苗42 d后选取长势一致的植株移栽于装有灭菌土 (沙土和黏土等体积混匀) 、直径为21.5 cm的塑料盆钵中。移栽2 d后, 分别浇稀释2倍、10倍、100倍的菌悬液100 ml, 2 d后以每株3 000粒卵的接种量将按1.1.2法制得的卵悬浮液分别滴注到盆栽番茄的根部, 各处理重复4次。 接种后的盆钵随机排列于温室内的平台上, 20～28 ℃培养56 d后缓慢取出各接种植株, 在水中洗净根系, 分别称根重和冠重。将根系置于解剖镜下, 记录根结数、卵块数 (用0.05%薯红溶液染色3～4 min)和每卵块平均卵量 (以随机取10块卵块的平均卵量计, 将10块卵块溶于1 ml的0.5% NaClO溶液中, 震荡1 min后吸取50 μl记数, 重复3次) 。按 Duncan氏新复极差法测验各处理间的差异显著性 (P0.01) 。 2 结果与分析 2.1 菌悬液的稀释对j2生长的影响 从表1可以看出, 处理后12 h, 菌悬液稀释5倍和10倍对幼虫的抑制作用略高于清水对照组, 但无显著差异。处理后24 h、36 h和48 h, 两处理组对南方根结线虫二龄幼虫 (J2) 的抑制作用逐渐增强, 与对照差异显著, 在处理后48 h, 菌悬液稀释5倍液可以使90.9%的J2处于僵直状态。与对照相比, 上清液的5倍和10倍稀释液在处理后12 h, 非常显著地抑制J2的活性, 使95%以上的幼虫处于僵直状态。而培养液5倍和10倍稀释液对照只有16.3%和5.1%的幼虫处于僵直状态。但处理后48 h, 5倍和10倍稀释液对J2活性的抑制作用逐渐减弱, 分别使9.6%和21%的J2处于僵直状态。上清液2倍稀释液对J2的抑制作用表现比较平稳。 从表2可以看出, 菌悬液的2倍和5倍稀释液在处理后4 d和6 d的卵孵化率低于清水对照组, 表明低稀释倍数的菌悬液在处理短期内可以明显抑制卵的孵化。而稀释10倍的菌悬液在处理后6 d、8 d和10 d的孵化率分别比清水对照高20.6%、39.6%、9.3%, 表明高稀释倍数的菌悬液对线虫卵的孵化有一定的刺激作用。上清原液2倍、5倍和10倍稀释液处理南方根结线虫卵6 d、8 d和10 d后, 卵的孵化率显著高于2倍和5倍稀释培养液对照, 表明上清原液的2倍、5倍和10倍稀释液都对南方根结