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高效液相色谱法测定注射用美洛西林钠的含量 暴露于梅隆西林钠（mellosi针头菌，1）的无菌粉末，是一种半合成青霉素。它对革兰氏阳性细菌、肝菌、肠杆菌和变形杆菌等革兰氏阴性细菌具有很强的抗菌作用，并被记录为卫生部药物标准（试验）[s]ws-131（x-113）-96（1）]。测定含量后，采用分光光度法进行测定。操作复杂，显色不稳定，容易误差。本文采用HPLC法测定1含量,方法简便、快速,结果准确。 1 高效液相检测 日本岛津LC-10Avp型高效液相色谱仪,包括LC-10 Avp型泵,SPD-10 Avp型紫外检测器,CTO-10 Avp型柱温箱,Class-VP色谱数据工作站。乙腈(色谱纯,美国Tedia公司);1样品(批号20010705及1对照品(含量97.84%)由山东天达药业有限公司提供。 2 方法和结果 2.1 总磷酸二氢钾-乙腈溶液4g/l 色谱柱:Shim-Pack CLC-ODS(150×6.0 mm,5 μm); 流动相:混合磷酸盐缓冲液(磷酸二氢钾4.9 g,磷酸氢二钾0.54 g用水溶解并稀释至1000 ml)-乙腈(65∶35,pH=6.1);流速1.5 ml/min;柱温40°C;进样量10 μl。 取1对照品溶液在190~270 nm波长范围内进行扫描,结果表明,1在208 nm处有最大吸收,响应灵敏度较高,故选择208 nm为测定波长。 2.2 色谱条件进样 精密称取1样品适量,用水溶解,取10 μl,按上述色谱条件进样,色谱图见图1。1的保留时间为2.7 min左右,理论板数3223,与相邻杂质的分离度3.34。 2.3 加样回归方程 取1对照品50 mg,精密称定,置50 ml量瓶中,用水溶解并定容,精密吸取3、4、5、6、7 ml各置10 ml量瓶中,加水定容,摇匀,经0.45 μm微孔滤膜过滤,分别取续滤液10 μl进样测定。以进样量Q对峰面积A进行线性回归,得回归方程为: A=5.63×105+1.84×106Q,r=0.9999。 结果表明:进样量在3~7 μg范围内线性关系良好。 2.4 进样rsd测定 取线性试验中浓度为0.5 mg/ml的溶液,连续进样6次,RSD=0.60%。 取同一份样品溶液在6 h内,每隔1 h测定一次,其峰面积的RSD=0.72%(n=6)。 2.5 加样回收和加标回收率 取已知含量的1样品适量,共3份,精密称定,置25 ml量瓶中,分别精密加入1对照品4、6、8 mg,加水溶解并定容,经0.45 μm微孔滤膜过滤,各取续滤液10 μl进样,按“2.6”项下方法计算回收率,结果回收率在99.9%~100.0%之间,RSD小于0.54%(n=6)。 2.6 微生物滤膜 取1样品约50 mg,置100 ml量瓶中,加水溶解并定容,摇匀,经0.45 μm微孔滤膜过滤,取续滤液10 μl进样。另取1对照品,同法操作。按外标法以峰面积计算含量。并与部颁标准法比较,见表1。