高效液相色谱-串联质谱法同时检测虾肉和猪肉中氟苯尼考和氟苯尼考.docxVIP

高效液相色谱-串联质谱法同时检测虾肉和猪肉中氟苯尼考和氟苯尼考 氯霉素（cap）是一种广泛用于动物和水的光谱抗生素。许多研究表明其毒副作用很强, 能够导致再生障碍性贫血症和致命的“灰婴综合症”。 我国和欧盟等国家都禁止在食用的动物源性产品中使用氯霉素。 用甲磺酰基取代氯霉素分子的对位硝基即甲砜霉素 (thiamphnicol, TAP) , 其抗菌谱与氯霉素相似, 毒性有所降低。氟苯尼考 (florfenicol, FF) 作为甲砜霉素的衍生物, 现已成为畜禽和水产养殖病害治疗和预防的常用药, 但仍然对动物胚胎有影响。 欧盟 (EEC) 96/23 公告中禁止氯霉素在动物源性食品中检出并规定其最高残留限量为0.3 μg/kg, 甲砜霉素最高残留限量为50 μg/kg, 氟苯尼考最高残留限量为1 000 μg/kg。 欧盟药品评审管理局 (E-MEA) 还规定氟苯尼考在动物可食性组织中的最高残留限量为氟苯尼考与氟苯尼考代谢物氟苯尼考胺 (florfenicol amine, FFA) 之和。 我国规定的这3 种氯霉素类药物在动物源性食品中的最高残留限量与欧盟相同。 2002 年1 月, 欧盟因为我国水产品多次被其检出氯霉素残留而发布2002/69/EC号决定, 全面停止进口我国动物与动物源性食品。该决定导致我国当年对欧盟水产品出口额比上年减少2.2 亿美元, 同比下降了48%。 随后其他国家也加强了对中国动物源性食品中氯霉素残留的检验力度, 而且范围还扩大到甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺。 鉴于此, 建立1 套简单、快捷、 高灵敏度的氯霉素类药物多残留检测方法十分必要。 目前检测氯霉素类药物残留的方法主要有高效液相色谱法、气相色谱法、气相色谱-质谱联用法、液相色谱-质谱联用法、超高效液相色谱法、超高效液相色谱-质谱联用法和酶联免疫法等。 气质联用法、液质联用法和超高效液相色谱-质谱联用法均能满足欧盟委员会2002/657/EC决议规定的结构信息, 且达到规定的4 个确证点, 被世界公认为检测氯霉素残留的标准方法。 现有的氯霉素类药物质谱确证方法往往需要将样品提取后进行多步净化处理, 过固相萃取小柱, 这样会导致前处理繁琐, 测试周期长等。 本试验中样品经过2%碱性乙酸乙酯提取, 浓缩定容后直接上机测定, 省去固相萃取 (SPE) 和液-液萃取 (LPE) 脱脂, 采用梯度洗脱, LC-MS/MS电喷雾电源 (ESI) , 负离子, 选择反应监测 (SRM) 模式检测, 旨在建立1 种同时检测虾肉和猪肉中氯霉素、甲砜霉素、 氟苯尼考和其代谢产物氟苯尼考胺残留的有效方法, 满足我国、欧盟和美国FDA对氯霉素类药物残留限量的要求。 1 材料和方法 1.1 氟苯尼考cas 对虾, 湛江国联水产开发股份有限公司;猪肉, 市售。 氯霉素 (99.0%, CAS号:56-75-7) 、甲砜霉素 (98.5%, CAS号:15318-45-3) ;氟苯尼考 (99.0%, CAS号:7321-34-2) , 德国Dr. Ehrenstorfer公司;氟苯尼考胺 (100%, CAS号:108656-33-3) , 加拿大Toronto公司;甲醇 (HPLC级) , 天津四友公司;乙酸乙酯、氨水 (25%~28%) 、无水硫酸钠等均为分析纯;水为超纯水;储备液 (100 μg/mL) , 用甲醇配置, -20 ℃冰箱保存, 有效期6 个月, 根据工作液的需要, 以甲醇∶水=3∶7 (体积比) 稀释至适当质量浓度。 1.2 le-doxs-126电子分析天平 TSQ Quantum Access液质联用仪 (配有ESI源) , 美国Thermo Fisher公司;METTLER-TOLE-DOXS-205 电子分析天平, 上海兰易科学仪器有限公司;Sartorius arium-611VF超纯水机, 上海摩速科学器材有限公司;HR2860 高速匀浆机, 荷兰皇家飞利浦电子公司;XW-80A漩涡混匀器、HU3120B超声波清洗器, 上海比朗仪器有限公司;TDL-5-A离心机, 上海安亭科学仪器厂;N-E-VAP111 氮吹仪, 美国Organomation公司。 1.3 负离子模式esi法 1.3.1 分析条件色谱条件:Thermo Fisher Hy-persil Gold C18柱 (150 mm×2.1 mm, 5 μm) ;进样体积:10 μL;柱温:30 ℃;流动相:甲醇-5 mmol/L乙酸铵, 梯度洗脱程序见表1;流速:250 μL/min。 质谱条件:电喷雾电离源 (ESI) , 负离子扫描模式;喷雾电压:-3800 V;鞘气压力 (N2) :3 MPa;碰撞气压 (Ar) :0.15 MPa;辅助气压力:0.8 MPa;毛