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不同时间赤霞珠叶片和根系对干旱胁迫的生理响应 细胞间效应（pcd）或细胞间效应（apollo营养元素）是指在一定条件下，细胞按照规定的程序结束其生命的过程。从细胞功能上看,一个多细胞生物体中,在正常条件下,某些细胞的死亡是细胞个体发育的一个阶段(最后阶段)。这种死亡是一种预定的,并受到严格程序控制的正常个体发育过程,称为程序性死亡(PCD)。程序性死亡是生物体调节正常发育和抗病、抗逆时不可缺少的一种生命活动,是细胞生命活动的基本特征之一。细胞程序性死亡涉及一系列基因的激活、表达以及调控等作用,是非病理条件下为更好地适应生存环境,而主动采取的一种死亡方式,其以细胞的固缩、染色质浓集、凋亡小体的形成及细胞核DNA特征性降解为主要形态及生化特征。 光镜与电镜一直是组织及细胞形态观察的最重要手段,观察细胞程序性死亡亦不例外。尤其是超微结构的观察可显示凋亡细胞的许多特征,是确定细胞程序性死亡发生的最可靠方法之一,且已在动物体中通过该方法观察到了细胞程序性死亡发生时细胞形态学的变化特征。目前,有关植物细胞程序性死亡的研究主要集中在细胞程序性死亡的特征、可能的信号传导途径和程序性死亡发生的重要相关酶等方面,尚未见有关植物体因外界环境变化或其他原因诱发细胞程序性死亡时,其细胞形态(无论是光镜还是电镜观察下)的变化规律及其与细胞被动死亡差异的报道。为此,本研究采用欧亚种(V.viniferaL.)酿酒葡萄赤霞珠(Cabernet sauvignon)作为试材,对干旱胁迫诱导的赤霞珠葡萄能否发生细胞程序性死亡的情况进行了探讨,以期为植物细胞程序性死亡的生理学机制研究奠定基础。 1 材料和方法 1.1 absnetsauvisnon育苗 供试品种为欧亚种(V.viniferaL.)酿酒葡萄赤霞珠(Cabernet sauvignon),2008-03-15扦插幼苗300株于花盆中,每盆1株。试验用花盆直径20 cm,高20 cm, 盆土为园土与河沙按质量比1∶1混合,每盆装等量的土样。 1.2 培养hoagman营养液 待幼苗长至8~10片完全叶时,精选后用自来水和蒸馏水冲洗干净,移入1/2 剂量Hoagland营养液中培养7 d后,改用全剂量的Hoagland营养液进行培养。培养过程中每天保持光照,每5 d 更换1次营养液,每天定时通气,试验用水皆为自来水。 在2008-06中下旬开始干旱胁迫处理。试验用20%的PEG6000作为渗透剂来模拟干旱条件(属于中度干旱,与之相对应的PEG溶液水势(Ψw)为-0.6 MPa),以正常营养液水培为对照,从干旱胁迫处理开始,每12 h选取幼苗顶端第4片生长一致的叶片以及新生白色根尖备用。 1.3 -干酵母菌-l底苯胺zea-双氧铀染色-包埋剂 取新生白色根尖,用锋利的双面刀切成2~3 mm小段;切取叶片主脉四周的叶肉组织,修成2~3 mm长,1~2 mm宽的小叶块,进行常规电镜处理。操作流程为:抽真空-前固定(戊二醛固定12 h)-漂洗(0.1 mol/L PBS漂洗3次)-后固定(1%锇酸4 ℃固定2 h)-漂洗(0.1 mol/L PBS漂洗3次)-丙酮水溶液脱水(体积分数30%,50%,70%,80%,90%的丙酮水溶液各脱水10 min,100%丙酮水溶液脱水2次,每次5 min)-包埋剂Epon812浸透包埋-LKB-8800型切片机超薄切片-染色(醋酸双氧铀染色后,再用柠檬酸铅染色)。然后在JEM100CX2Ⅱ型透射电镜下进行超微结构观察、测量并照相。 2 干旱胁迫对干旱胁迫的组 观察发现,在干旱胁迫处理的48 h内,从外部形态上很难区分未进行干旱胁迫处理的对照组和干旱胁迫的处理组。干旱胁迫处理48~120 h,胁迫组赤霞珠葡萄叶片边缘发生轻微卷曲,叶片黄化,根部颜色变深,葡萄生长缓慢,120 h以后胁迫组葡萄叶片中部出现坏死的小斑点,边缘卷曲且坏死,根尖由白色转为深褐色,葡萄萎蔫。 2.1 形态变异的处理 无论是叶片的栅栏组织还是海绵组织,处理前正常组织中各细胞器的超微结构都处于正常形态。用20%PEG6000处理不同时间后,各细胞器开始出现不同程度的形态变化。电镜观察发现,随着干旱处理时间的延长,叶片海绵组织中各细胞器形态变化的时间均早于栅栏组织,且变化程度也大于栅栏组织。 2.1.1 海绵组织核酸染色质和组织形态 对照组中,赤霞珠叶片细胞核呈圆形或椭圆形,基质均匀、清晰(图1-A)。在胁迫组中,干旱胁迫处理48 h时,叶片海绵组织细胞核染色质凝聚并边缘化(图1-B),干旱胁迫120 h时,细胞核基质浓缩,细胞核变形(图1-C)。与对照组(图1-D)相比,在干旱胁迫处理48 h时,栅栏组织细胞核染色质开始凝聚并边缘化(图1-E),至干旱胁迫132 h时细胞核几乎解体(图1-F)。 2.1.