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电针对褥疮大鼠血清no及e-1的影响 床垫伤口与中医文献中记载的“伤口”相似。这是一种由长期局部组织压迫引起的伤口，是一种持续缺氧、缺氧和营养不良引起的组织坏死疾病。本病可以从局部皮肤疮疡进一步加重累及肌肉和骨骼,并且严重的影响病人的活动能力。有研究表明本病护理是仅次于癌症和心血管病之后的花费最为昂贵的疾病,给家庭和社会带来了沉重的负担。因而探索和寻找预防和治疗褥疮的有效手段成为国内外医学研究的热点。本实验观察电针对大鼠褥疮不同时间点血清NO和ET-1含量的影响,探讨电针治疗褥疮的疗效及可能机理,阐述电针疗效与损伤组织愈合的关系。 1 材料和方法 1.1 实验动物 健康雄性SD大鼠75只,体重250 g~300 g,由黑龙江中医药大学动物实验中心提供。 1.2 实验仪器与设备 ET-1放射免疫试剂盒(由东亚免疫技术研究所提供),Synergy MX酶标仪(美国BIOTEK公司),低温高速离心机SCR 20 BA(日本日立公司),KY2000半自动生化仪(天津开元医疗设备有限公司),G6805-Ⅱ电针仪(上海医用电子仪器厂)。 1.3 血清学检测大鼠中的免疫反应 造模:(1)大鼠用10%水合氯醛按350 mg/kg腹腔注射进行全身麻醉,俯卧固定于立体定位仪上,背部脱毛处理,备皮区域为7 cm×9 cm,再用0.5%碘伏对备皮区进行消毒。(2)背部靠头端正中线1 cm处做一深至筋膜,长约3 cm的横向切口。(3)钝性分离组织,将重5 g,体积为4 cm×2.5 cm×0.05 cm的钢片植入大鼠左背部皮下,所有钢片在移植前均高压灭菌并温箱(70℃,2 h)烤干。缝合切口,用碘伏消毒以防止感染。(4)术后24 h在钢片植入处放置磁(4.0 cm×2.25 cm×1.0 cm),开始皮肤缺血-再灌注损伤循环。磁铁对皮肤产生压力,造成局部组织缺血,每次缺血2 h后将磁铁取下,让局部血流恢复30 min。如此循环,每日每只大鼠进行5个连续的循环,连续2天。总计缺血-再灌注10个循环,缺血时间20 h。(5)缺血再灌注过程中大鼠自由进食、饮水,单笼饲养。以皮肤变黑、糜烂,针刺不出血作为判断Ⅲ期及其以上压疮形成的标准。(6)造模结束后,取出钢片,缝合伤口,清洁伤口及创面。 分组与治疗:将75只褥疮大鼠使用随机数字表随机分为电针组、针刺组和空白组,每组25只,并分为1天、3天、7天、14天、21天共5个时间点,每个时间点各5只。电针组:先给予针刺治疗,即采用傍刺手法,0.5寸华佗牌针灸针以创面中心为第一进针点,方向直刺,深度为0.2寸,距离皮肤创面1 cm处为第二进针点,进针角度要求平刺,深度也为0.2寸,之后连接6805-B电针仪,其中负极置于损伤的皮肤中心,正极置于距损伤皮肤边缘1 cm处,电流强度为1 m A,频率为1 Hz,留针时间30 min,每日1次;针刺组:先给予针刺治疗(方法同电针组),之后连接电针仪(正负极连接方法同上),但不通电;空白组:只给予碘伏常规治疗。 以上各组动物分别于治疗时间点结束后各取腹主动脉血2 ml,经离心后取出上清液,分装于EP管中,-80℃超低温冰箱保存待测NO、ET-1含量。 1.4 et-1测定 分别采用硝酸还原酶比色法检测NO含量(北京晶美生物工程有限公司提供试剂盒),放射免疫测定法检测ET-1含量(北京东亚免疫技术研究所提供试剂)。 1.5 方差齐性分析 全部数据采用SPSS 17.0统计软件进行分析处理,对计量资料先行正态性检验与方差齐性分析。计量资料数据以均数±标准差表示,组间差异性比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA),方差齐性比较采用LSD法,方差不齐者进行Dunnet’s T3检验,以P0.05为有统计学意义。 2 结果 2.1 电针大鼠血清no含量比较 治疗1天时,3组内血清NO含量基本相当,3组组间比较,P0.05。治疗3天时间点开始,电针组大鼠血清NO含量迅速升高,在14天时达到峰值;空白组血清NO含量各时间点逐渐降低,针刺组无明显变化。见表1和封三彩图1。 2.2 两组et-1含量的变化 治疗1天时,3组大鼠血清ET-1含量基本持平,3组组间比较,P0.05。治疗3天时间点开始,电针组大鼠血清ET-1含量开始降低,在14天时降至最低含量;另两组无明显变化。针刺组至7天时血清ET-1含量也有所下降,其中电针组下降幅度大于针刺组。见表2和封三彩图2。 2.3 血清中的no和et-1含量之间的关系 实验发现3组大鼠血清NO与ET-1二者具有拮抗关系。其中在电针组内的变化关系最为明显,见封三彩图3。 3 no和et-1对皮肤产品的再灌注损伤机制 褥疮又称压疮、压力性溃疡。在压疮的形成过程中,压力因素是重要原因之一,而由压力引发的组织缺血以及组织受压后的缺血再灌注损伤(Is