动植物细胞培养.pptVIP

第三十一页，共八十页。 无血清培养基一般由基础培养液和替代血清的补充因子组成： 基础培养基：是各种营养物质的混合物，是维持组织或细胞生长、发育、遗传、繁殖等一系列生命活动比不可少的物质，基础培养基的成分是完全已知的，而且可以按照细胞的不同营养要求增加或减少某些(mǒu xiē)组分。 补充因子：是用来替代血清的各种因子的总称。其种类很多，包括大分子、小分子物质和微量元素等。补充因子又可分为必需补充因子和特殊补充因子。 第三十二页，共八十页。 三类(sān lèi)无血清培养基： 类型 确定程度 优点 缺点 1 2 3 无蛋白质，所有成分明确 含有纯化蛋白和激素 非确定性生物添加剂取代血清 化学成分完全明确 应用较广 价格低廉，可以灭菌 只适用于一些确立细胞系 相对比较昂贵 化学成分不太明确 第三十三页，共八十页。 4、培养基制备(zhìbèi)应考虑的因素 （1）pH值：一般正常的成纤维细胞系以pH=7.4～7.7最好，转化细胞以7.0～7.4更合适，上皮细胞5.5合适。 （2）缓冲能力：碳酸盐缓冲系统由于毒性小、成本低，对培养物有营养作用，因此比其他缓冲系统用得多。但在生理pH值条件下的缓冲能力差。 （3）渗透压：一般常用冰点降低(jiàngdī)或蒸汽压升高测定。 （4）黏度：培养基黏度受血清含量影响，在多数情况下，对细胞生长没有什么影响。 第三十四页，共八十页。 三、动物(dòngwù)细胞培养方法 动物细胞 培养方法 悬浮培养 贴壁培养 固定化培养 第三十五页，共八十页。 1、悬浮(xuánfú)培养 悬浮培养是指细胞在培养器中自由悬浮生长的过程，主要用于非帖壁依赖性细胞的培养。 悬浮培养对设备的要求(yāoqiú)简单，但是悬浮培养的细胞密度较低，转化细胞悬浮培养有潜在致癌危险，培养病毒易失去病毒标记而降低免疫能力。 第三十六页，共八十页。 2、贴壁培养 贴壁培养是指必须贴附在固体介质表面上生长的细胞培养，主要用于非淋巴组织和多异倍体等贴壁依赖性细胞的培养。由于(yóuyú)大多数动物细胞属于贴壁依赖性细胞，贴壁培养是动物细胞培养的一种重要方法。 第三十七页，共八十页。 细胞贴壁一般分为贴壁因子(yīnzǐ)吸附于培养表面、细胞与表面接触、细胞贴壁于培养表面和壁细胞在培养表面上扩展等几个步骤。 第三十八页，共八十页。 3、固定化培养(péiyǎng) 固定化培养是既适用于帖壁依赖性细胞(xìbāo)，有适用于非帖壁依赖性细胞(xìbāo)的包埋培养方式，具有细胞(xìbāo)生长密度高、抗剪切力和抗污染能力强等优点。一般对于贴壁依赖性细胞(xìbāo)通常采用胶原包埋，而对于非贴壁依赖性细胞(xìbāo)则常用海藻酸钙包埋。常用的细胞(xìbāo)固定化的方法主要有吸附、共价帖附、离子/共价交联、包埋和微囊化等。 第三十九页，共八十页。 四、动物(dòngwù)细胞培养技术和工艺 大规模动物(dòngwù)细胞培养的工艺流程 第四十页，共八十页。 工艺过程中，先将组织切成碎片，然后用溶解蛋白质的酶处理而得到单个细胞，再用离心法收集细胞。将细胞植入营养(yíngyǎng)培养基，使细胞在培养基中增殖到覆盖瓶壁表面，用酶把细胞从瓶壁上消化下来，再接种到若干培养瓶中进行扩大培养，将培养所得的细胞“种子”冷藏于液氮中，从液氮中取出一部分细胞“种子”进行解冻、复活培养，进行扩大培养以获得足够的细胞量，将细胞接种于大规模生物反应器中进行大规模培养，按照产物的不同形式进行产物分离纯化。 第四十一页，共八十页。 第三节 植物(zhíwù)细胞的培养 一、植物细胞培养流程 二、植物细胞(xìbāo)培养基的组成 三、植物细胞培养的方法 四、植物细胞的大规模培养技术 五、影响植物细胞培养的因素 第四十二页，共八十页。 植物细胞培养是指在离体条件下培养植物细胞的方法。将愈创组织或其他易分散的组织置于液体(yètǐ)培养基中，进行振荡培养，使组织分散成游离的悬浮细胞，通过继代培养使细胞增殖，获得大量的细胞群体。小规模的悬浮培养在培养瓶中进行，大规模可利用发酵罐生产。 第四十三页，共八十页。 植物细胞培养能生产一些微生物所不能合成的特有代谢产物，如生物碱类（尼古丁、阿托品、番茄碱等）、色素（叶绿素、类胡萝卜素(hú luó bo sù)、叶黄素等）、类黄酮和花色苷、苯酚、皂角苷、固醇类、萜类、某些抗生素和生长控制剂（赤霉素等）、调味品和香料等。 细胞培养用于种苗生产，如兰花等名贵花卉和谷物良种的培育，可不受外界环境的影响。 第四十四页，共八十页。 工业化生产的植物(zhíwù)细胞培养产物 第四十五页，共八十页。 一、植物(zhíwù)细胞培养流程 植物细胞培养与微生物培养类似，可采用液体培养基进行悬浮培养。植物组织细胞的分离