新菌系混菌状态对产酸的影响.docxVIP

新菌系混菌状态对产酸的影响 维生素c的第二个步骤是混合菌发酵，其中l-山梨糖合成维生素c-前体2-冠朱拉酸（kga）。最初筛选的混菌体系为氧化葡萄糖酸杆菌与条纹假单孢杆菌的组合, 前者为产酸菌 (俗称小菌) , 后者不产酸, 但可促进前者产酸, 也称伴生菌;1988年, 宁文珠等以巨大芽孢杆菌代替条纹假单孢杆菌获得成功, 后经不断改进, 目前生产上大多使用的混菌体系为巨大芽孢杆菌和小菌的组合, 使糖酸转化率已由最初的39.7% (糖浓度7%, 6d) 提高到79.5%, 可见菌种本身性能直接影响发酵的特性。本文是在与小菌组成新菌能够产酸基础上, 对新的混菌体系中混菌状态对发酵产酸的影响进行了研究, 旨在揭示二步发酵机制, 指导生产。 1 材料和方法 1.1 y49y49 1.1.1 掷孢酵母 (Sporoblomyces roseus) Y44, 由中科院生态研究所菌种室提供。 1.1.2 巨大芽孢杆菌 (Bacillus megaterium) 和氧化葡萄酸杆菌 (Gluconobacter oxydans) 2980, 由东北制药总厂提供。 1.2 培养基 采用掷孢酵母、氧化葡萄糖酸杆菌及巨大芽孢杆菌适合培养基。 1.3 分析 1.3.1 生长曲线的测量 光密度法。 1.3.2 测定kga含量的原因 碘量法。 1.3.3 测定剩余糖的方法 蒽酮试剂法。 2 结果与分析 2.1 不同生理状态种液生长产酸曲线 接种种液的生理状态直接影响到发酵效果, 以酸含量作为混菌菌龄的一种指标, 本实验选取四组不同生理状态的种液, 分别为实验I、实验II、实验III、实验Ⅳ (见表1) , 进行发酵, 测定生长产酸曲线, 结果见图1。以产酸量来看, 实验III混合体系中菌群生理状态 (含酸量4.1-5.5) 最有利于KGA的积累。 2.2 混菌体系中酵母菌群和产酸的变化 选取表2所示的4组不同比例菌群数量的种液, 进行发酵, 作生长产酸曲线, 结果见图2。从图2可以看出, 混合菌菌群数量比例不同, 产酸也不同。混菌体系中掷抱酵母数量越大, 掷抱酵母生长量越大, 混菌体系氧化葡萄糖酸杆菌数量以处理III比例最适, 其在发酵过程中生长量大, 积累KGA的能力高。以上说明, 掷抱酵母与氧化葡萄糖酸杆菌混合发酵形成一个小型的生态环境, 在这个小生境中, 二者相互影响、相互制约, 并相应地影响到KGA的最终积累。 2.3 发酵液中各接种量对发酵及接种量的影响 选取4组不同混菌菌群生物量的种液 (表3) , 进行发酵, 测定生长产酸曲线, 结果见图3。从图3看出, 同一发酵时间, 随着接种量的增加, 产生KGA增多, 但随着发酵时间的延长, 即当菌群浓度增加到一定程度〈III〉, 产酸量不再提高, 掷抱酵母、氧化葡萄杆菌的生长也有类似特点, 当菌浓度增加到一定程度时, 不再增加, 因为发酵液中养分是一定的, 菌的最终浓度和活性都有一个限度, 相应的KGA的积累也有一个限制, 当发酵时间为64h左右时, 各接种量的菌浓度和产酸量已相差不大, 可见接种量只能提高菌的增长速度和KGA的积累速度, 增加接种量可适当缩短发酵周期, 但对KGA终产量没有太大影响。 综上, 新组合菌系具有较高产酸能力, 不同生理状态, 产酸不同。混菌种液中的二菌比例 (氧化葡萄酸杆菌/掷孢酵母) 为26-35∶1, 含KGA为4.1-5.5mg/ml, 菌群生物量为0.46-0.60 (OD值) 时有利于产酸。