医学免疫学实验课件：免疫酶技术.pptVIP

免疫酶技术基本原理免疫标记技术（immunolabellingtechnique）:是指用荧光素、放射性同位素、酶、发光剂或电子致密物质等作为示踪剂，标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应。特点：高度灵敏、特异、快速，定性、定量、定位。分类：免疫酶技术、免疫荧光技术、放射免疫技术、免疫电镜技术、免疫胶体金技术和发光免疫测定。免疫酶技术：是利用酶标记抗体或抗原，以检测相应抗原或抗体的一种免疫学标记技术。酶联免疫吸附试验（ELISA)

（enzymelinkedimmunosorbentassay）

是一类常用的免疫酶技术。是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相表面进行。常用的酶：辣根过氧化物酶,底物为邻苯二胺。常用的方法间接法双抗体夹心法抗原竞争法.????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????

IndirectELISAantigenSpecificantibodyEnzyme-markedantibodycolourlesssubstrateColorproducts?SandwichComplexantibodyantigenEnzymeconjugatedantibodySandwichELISA?SandwichELISAChromogenicenzymesubstrateColorproducts?CompetitiveELISAEnzyme-labeledAntigenAntigenReactionProduct?CompetitiveELISA底物颜色产物双抗体夹心法：用于检测特异抗原。将已知抗体包被固相，加入待检标本，标本中含有相应抗原即与固相上的抗体结合，洗涤去除未结合成分，加入该抗原特异的酶标记抗体，加底物显色。目的：*掌握ELISA技术*检测血清中IgG含量材料：抗人IgG抗体（羊抗人IgG抗体）（一抗）已知IgG含量的参考蛋白（作标准系列）待检人血清辣根过氧化物酶标记的抗人IgG抗体（二抗）包被液：PH9.60.05mol/L碳酸盐缓冲液洗涤液：PH7.40.01mol/LPBS底物溶液：OPD-H2O2终止液：2mol/LH2S04酶标反应板（一排/人）ELISA方法检测人血清中IgG操作步骤包被一抗（已做）;洗涤3次;加样：将已知含量的参考蛋白IgG倍比稀释7孔，第8孔加待检血清、第9孔加阴性对照，第10孔作空白对照（100ul/孔）。100ul稀释液待测血清PBS-T20100ul标准品100ul100ul阴性对照待测对照空白孵育（37℃30min）；洗涤3次；加酶标记的抗人IgG抗体（即二抗）(100ul/孔)，孵育（37℃30min）；洗涤3次；显色（加底物溶液，100ul/孔。室温避光15-30min）；终止反应；检测(490nm波长下检测)。操作步骤结果观察与分析空白对照应无色；阳性孔呈棕黄色，标准系列各孔呈明显的颜色深浅梯度；绘制标准曲线。注意事项做倍比稀释时，应从高浓度到低浓度；显色时一定避光；检测时应避免孔中有气泡。*TheamountofimmobilizedproteinisdeterminedfollowingtheprincipleofaindirectELISA:Thefirststepisthephysisorptionoftheproteinonthebiomaterialsurface.Thenthelinkageofthespecificantibodytotheproteinfollows.Afterseparationoffreespecificantibody,thesurfaceistreatedwithasolutionofanenzyme-markedantibody,asocalledsecondaryantibody.Aftersepar