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6种常用水产药物对1龄东北林蛙急性毒性试验

拉娜dybayski，又名雪鹭和哈萨克斯坦虎，属于青蛙科和青蛙科，与中国云杉是具有密切亲和力的有效品种（谢峰等人，1999）。东北林蛙以其特有的药用价值与营养价值日益被人们所重视(佟庆,2009)。近年来,林区开展了大规模的全人工养殖,林蛙养殖全技术逐渐成熟。但养殖过程中常使用药物进行消毒或治疗疾病,但由于剂量和操作等原因造成林蛙的中毒乃至死亡。林蛙是新兴的养殖品种,养殖的时间较短,对于常用药物在东北林蛙养殖过程中的适用性未见相关报道,而在鱼类研究中相对较多(刘国光等,2004;张耀武等,2009;李代金等,2010)。

强氯杀星、强力消毒粉、高锰酸钾、顶点、三九菌毒清和百菌杀均属于常用消毒剂,本试验选择这6种药物对1龄东北林蛙进行毒性试验,旨在为东北林蛙人工养殖时的疾病防治和科学用药提供参考。

1材料和方法

1.1幼蛙暂养试验

试验林蛙取自佳木斯市莲江口镇林蛙养殖场人工繁殖的东北林蛙1龄蛙,选择同一批繁殖、外观正常、无疾病、体质健壮、规格基本一致的蛙作为试验材料,试验林蛙平均体长为(7.5±2.3)cm,平均体重为(3.1±1.2)g。试验前将幼蛙暂养在玻璃箱中24h,以适应试验环境,暂养期间不投饵。

所用试验药物的种类与规格如表1所示。

1.2水温和光照对林蛙的影响

试验在合江林业科学研究所综合实验室内进行。试验时间为2010年9月1日-10月15日,试验所用容器为38cm×28cm×20cm的玻璃缸,试验用水为经曝气24h的自来水,每个容器内放1L的水,水量以林蛙头部稍露出为宜。试验期间水温变化范围为18～25℃,pH7.0～7.5,溶氧量6.0～6.25mg/L,为减少光照对东北林蛙的影响,试验在室内弱光的条件下进行。

试验前先进行预试验,并根据预试验的结果确定各试验药物的浓度区间,然后按等对数间距设置5个浓度梯度组和1个空白对照组。每组放10尾林蛙,每隔24h换药液1次,以保证试验药物的浓度。试验开始后进行8h连续观察,记录林蛙的活动和成活情况,及时剔除死亡的个体,并详细记录林蛙在24、48、72和96h的死亡率。死亡症状以后肢伸直,针刺无反应作为判断死亡标准。各试验液药物的浓度梯度见表2。

1.3半致死浓度的计算

数据的分析整理运用SPSS17.0软件。6种药物的试验结果的数据处理采用Bliss法计算,求出东北林蛙对不同药物24、48和96h的半致死浓度(LC50)。安全浓度计算公式:SC=96hLC50×0.1。

2结果与分析

2.16不同药物、不同浓度及作用时间药物急性毒性的比较

6种试验药物的高浓度组使东北林蛙不同程度的中毒并致死。但不同药物、不同浓度及作用时间所产生的中毒情况却不尽相同,死亡率一般随药物浓度的提高和药浴时间的延长而升高。具体试验结果见表3～表8。

2.2林蛙在不同浓度下的死亡率

所选择的药物均对东北林蛙有一定的致死性,且致死率和浓度、接触时间呈一定相关性,随着浓度的增加及处理时间的延长,林蛙的死亡率均呈上升趋势。

2.3标准l50的评价标准

林蛙养殖中多使用渔药作为消毒杀菌药物,故本研究参考渔药毒性分级标准划分药品毒性等级。农药对鱼类毒性等级评价标准LC50划分为4级:小于0.1mg/L为剧毒,0.1～1mg/L为高毒,1～10mg/L为中毒,大于10.0mg/L为低毒。据此标准百菌杀为低毒物品,强氯杀星、强力消毒粉、高锰酸钾、顶点、三九菌毒清和百菌杀均属于中毒药品。但强氯杀星、强力消毒粉具有较强的刺激性气味。

3讨论

3.1计数ld50

Bliss法,即最大或然性法,1938年被提出,由于计算繁琐复杂,多年来应用较少,但此法计算非常精确,是目前认为最严谨的半数致死量(LD50)的计算方法(操继跃,1992;黎七雄等,1995)。Bliss法可利用相关软件进行计算,近年来有一些应用(周勇等,2009)。

3.2内在配方的受害者

林蛙的皮肤无鳞片或骨质,是完全没有覆盖物的被皮系统,通透性极强,并可参与机体的呼吸作用,这是与其他动物不同的。

当皮肤与高浓度KMnO4接触时,由于皮肤呼吸,KMnO4分子内渗,与表皮生发层细胞和皮质层细胞接触,使之氧化变性,呼吸功能受损,这样表皮内外成分不能相互渗透。一方面,可造成皮下淋巴液积压,出现积水现象(王凡和郭向萌,2009)。本研究中,KMnO4在24h的半数致死量为23.798mg/L,与相关报道的0.01%～0.02%安全浓度(白秀娟和刘伯,2002)低得多,可能由于林蛙个体差异造成的。同时,KMnO4在鱼的急性毒性试验中的安全浓度一般在0.50～0.75mg/L(操继跃,1992),较林蛙的2.16