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响应表面实验设计优化茯苓皮中茯苓多糖的提取工艺

椰子皮是多孔菌科的一种杏仁科（schw）wolf菌核的表皮。椰子皮在临床上很少使用，大部分作为残留物被用作垃圾。茯苓皮中含有一定量的茯苓多糖,茯苓多糖具有保肝降谷-丙转氨酶、增强免疫、镇静、降血糖及抗肿瘤等作用,被广泛应用于中成药、保健食品、美容药膳,具有较好的开发前景。潘琦、段启等曾分别进行过水提、碱提单因素实验研究和有机溶剂提取工艺的研究,本研究在水提、碱提和超声波提取单因素实验研究的基础上利用响应表面实验设计优化最佳提取工艺条件,为茯苓皮的开发利用奠定基础。

1设备

1.1超声波提取器

UV-752型可见紫外分光光度计;JJ系列电子天平;赛多利斯BS系列电子天平;HH·S型电热恒温水浴锅;HS10260D超声波提取器;XYJ-802离心沉淀机。

1.2椰子皮

云南思茅地区加工茯苓白块所切削的茯苓皮干品,粉碎备用。

1.3苯酚溶液的制备

浓硫酸、氢氧化钠、苯酚、无水葡萄糖均为国产分析纯。苯酚溶液:称取苯酚6g,加水至100ml即得。葡萄糖标准液:精密称取105℃下干燥恒重的葡萄糖100.3mg加蒸馏水溶解并定容至100ml。

2方法和结果

2.1椰子糖测定

采用硫酸-苯酚法按文献中的方法测定。

2.2水源处理

称取一定量茯苓皮,在料液比一定的条件下,考察提取次数、提取时间和提取温度与茯苓多糖提取量的关系。

2.3超声波提取法

称取一定量茯苓皮,在料液比一定的条件下,考察超声提取时间和提取温度与多糖提取量的关系。

2.4碱性法提取茶多酚

称取一定量茯苓皮,在料液比一定的条件下,室温提取30min,考察碱浓度与多糖提取量的关系。

2.5水源处理

2.5.1提取次数对茯苓多糖提取量的影响

称取一定量茯苓皮,在料液比1∶40,提取温度95℃,提取30min/次的条件下,考察提取次数与茯苓多糖提取量的关系。(结果见图1)由图1可知,茯苓皮提取的多糖量随累积提取次数的增加而增加,但从第2次开始提取的多糖量并迅速减小,综合考虑提取过程中的能耗、水耗等因素,宜采用一次提取。

2.5.2提取时间对多糖提取量的影响

称取一定量茯苓皮,在料液比1∶40,提取温度95℃,提取一次的条件下,考察不同提取时间与多糖提取量的关系。(结果见图2)由图2可知,在10～20min之间,茯苓皮多糖的提取量随提取时间的增加快速增加,20min之后则变化缓和,故提取时间以20～30min为宜。

2.5.3提取量的关系

称取一定量茯苓皮,在料液比1∶40,提取时间30min,浸提一次的条件下,考察提取温度与多糖提取量的关系。(结果图3)由图3可知,茯苓皮中多糖提取量在20～40℃之间随提取温度的增加而增加,温度高于40℃后则呈下降趋势,60～80℃之间变化不大,在沸腾状况(95℃)下原料处于不断运动状态,其多糖提取量有所上升,提示搅拌使茯苓皮不断运动有利于多糖的提取,故宜选用40℃搅拌提取。

2.6超声波提取法

2.6.1超声时间的确定

称取一定量茯苓皮,在料液比1∶40,超声频率40kHz,超声提取一次的条件下,考察超声提取时间与多糖提取量的关系。(结果见图4)由图4可知,茯苓皮多糖提取量随超声时间的增加而增大,当提取时间达到30min后,提取时间对提取量的影响减小,曲线变得较平缓。故一次超声提取的时间以30min为宜。

2.6.2超声提取次数对多糖提取量的影响

称取一定量茯苓皮,在料液比1∶40,超声频率40kHz,超声提取30min/次的条件下,考察超声提取次数与多糖提取量的关系。结果见图5。

2.7naoh浓度对茯苓茯苓皮多糖提取量的影响

称取一定量茯苓皮,在料液比1∶200,室温浸提30min条件下,考察碱浓度与多糖提取量的关系。结果见图6。结果表明茯苓皮多糖提取量在NaOH浓度0.25～0.5mol/L之间呈上升趋势,当浓度大于0.5mol/L以后呈下降趋势,故宜选NaOH浓度为0.5mol/L为中心点进行二次旋转正交组合实验。

从图7可知,碱法提取多糖得率最高,故选择碱法进行进一步的优化工艺研究。

2.8回归模型及方差分析

为了全面分析碱提过程中各因素交互作用对茯苓皮提取过程的影响,在料液比1∶150条件下,本研究采用23旋转响应表面实验设计进行,影响因子为NaOH浓度、浸提时间,结果指标为茯苓皮的多糖提取量。实验结果采用二次回归分析和方差分析,根据回归方程得出适宜的碱提工艺条件。实验设计及其测定结果见表1～2。

用两因子二次旋转正交组合实验统计程序对表2结果进行回归分析和方差分析,得到以多糖提取量为指标,以NaOH浓度X1(mol/L)和提取时间X2为变量的二次回归方程及其方差分析结果(见表3),结果表明茯苓皮多糖碱浸提