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高效液相色谱法测定青霉素的工艺研究

青霉素也被称为青霉（pgi）、青霉素钠、酪氨酸、酪氨酸钾、酪氨酸钾等。青霉素是指从青霉菌培养液中提制的分子中含有青霉烷、能破坏细菌的细胞壁并在细菌细胞的繁殖期起杀菌作用的一类抗生素。青霉素具有抗菌活性强,疗效高,毒性低等优点。青霉素G是弱酸,目前国内外生产中大多采用溶媒萃取法,生产中能耗大。本文对青霉素提取工艺进行研究。

1仪器、设备和测试仪器

LC-100(梯度配置)高效液相色谱仪(上海伍丰科学仪器有限公司);henomenex通用型保护柱(广州菲罗门科学仪器有限公司);KHW-D-1LC精密拉伸水浴锅(上海科恒实业发展有限公司);双向磁力搅拌器(北京来亨科贸有限责任公司);AP-01P型无油真空泵(天津奥特赛恩斯仪器有限公司);奥豪斯Explorer专业型分析天平(奥豪斯仪器上海有限公司);PS3200超声波震荡器清洗机(普洛帝中国服务中心);5418R小型台式冷冻离心机(Eppendorf中国有限公司);MW实验室级超纯水器(北京盈安美诚科学仪器有限公司);精密离子计PXS-4509(上海大普仪器公司);XSYF-D实验室废水处理设备(北京湘顺源科技有限公司);酸度计(上海精密仪器仪表有限公司)。青霉素G钠盐(华北制药集团),磷酸三丁酯(上海翔康科技发展有限公司),煤油(上海千峰化工有限公司),KH2PO4(青岛市鹏远化工贸易有限公司),甲醇(广西明利化工有限公司)。

2实验

2.1水相中单级萃取率实验结果

磷酸三丁酯为载体,煤油为稀释剂,将20mL的有机相和20mL水溶液放入锥形瓶中,恒温水浴中振荡5分钟后,将溶液取出放入分液漏斗中分层,采用高效液相测定青霉素的摩尔浓度。磷酸三丁酯浓度600mmol/L时,分别采用水相中的pH值为3.1、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、7.0进行实验。实验结果表明水相中的pH值3.1时,单级萃取率为86.2%;水相中的pH值3.5时,单级萃取率为76%;表明水相中的pH值4.0时,单级萃取率为56.2%;水相中的pH值4.5时,单级萃取率为46.3%;水相中的pH值5.0时,单级萃取率为38.1%;水相中的pH值5.5时,单级萃取率为30.8%;水相中的pH值6.0时,单级萃取率为22.8%;水相中的pH值6.5时,单级萃取率为14.2%;水相中的pH值7.0时,单级萃取率为5.6%。实验结果表明水相中的pH值3.1时效果最好。水相中的pH值为3.1时,分别采用磷酸三丁酯浓度为100mmol/L、200mmol/L、300mmol/L、400mmol/L、500mmol/L、600mmol/L进行实验。实验结果表明磷酸三丁酯浓度为100mmol/L时,单级萃取率为29.9%;磷酸三丁酯浓度为200mmol/L时,单级萃取率为43.2%;磷酸三丁酯浓度为300mmol/L时,单级萃取率为60.6%;磷酸三丁酯浓度为400mmol/L时,单级萃取率为68.3%;磷酸三丁酯浓度为500mmol/L时,单级萃取率为76.2%;磷酸三丁酯浓度为600mmol/L时,单级萃取率为86.2%。实验结果表明,磷酸三丁酯浓度为600mmol/L时效果最好。

2.2u3000催化氧化法

先在左右两室中分别加入一定量的8.69mg/ml的青霉素G溶液,用磷酸盐缓冲液调节pH值到5.0,料液相总体积为150毫升和0.1mol/L的Na2CO3溶液(用质量分数10%的硫酸调节pH到7.0),总体积为150毫升,再在其上方缓慢加入15%的TBP-3%的异辛醇-煤油为液膜相,总体积为80毫升,两侧分别逆行搅拌(料液相搅拌转速为每分钟150转,反萃相搅拌转速为每分钟155转),操作温度为二十二摄氏度。实验结果在经过8小时后,料液相中青霉素G的浓度仍旧高于反萃相中的浓度,提取效率较低。

2.3树脂吸附实验

采用DM11、D845、D201、330四种树脂进行实验。树脂柱高25厘米,装树脂10克,树脂颗粒为400pm。将20毫升浓度为30mg/ml,ph值为6.5的青霉素G溶液上柱,采用20%丙酮洗脱,流量5ml/min,碘量法测定青霉素浓度,利用软件Matlab5.3计算吸附量、洗脱率。实验结果表明DM11树脂吸附量为0.65g/g,洗脱率为88.32%,洗脱剂用量为590毫升;D845树脂吸附量为0.51g/g,洗脱率为65.31%,洗脱剂用量为493毫升;D201树脂吸附量为0.56g/g,洗脱率为65.1