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基质细胞衍生因子-1对大鼠脑梗死后梗死灶的影响

中风后的血管再生是指从血管中产生的新血管的过程，包括血管中皮细胞的培养、位移和分化。不同层次的细胞外基质分解、管腔形成和毛细血管生成。研究表明,多种外源性促血管再生因子可以促进脑梗死后局部缺血组织的血管再生。近年来,国内外学者对脑梗死的研究除继续关注于局部缺血组织外,对远隔部位的继发性损伤也日益重视,发现远隔损伤对脑梗死后期神经功能的恢复有重要影响。我们之前的研究发现,脑梗死发生后,除局部缺血组织的新生血管明显增加外,在远离梗死灶的远隔部位亦存在血管再生现象,提示外源性给予促血管再生因子有可能通过促进远隔部位的血管再生来减轻远隔损伤,从而加快脑梗死后神经功能的恢复。基质细胞衍生因子-1α(Stromal-derivedfac?tor-1,SDF-1α)是一种促血管生成因子。研究表明,SDF-1α可促进下肢动脉闭塞、心肌梗死及脑缺血等疾病局部缺血组织的血管再生。迄今为止,尚无SDF-1α对脑梗死后远隔部位影响的报道。本研究采用成年大鼠的局灶性大脑皮层梗死模型,观察连续性侧脑室注射SDF-1α对远离梗死灶的同侧丘脑细胞增殖和血管再生的影响,并探讨其可能的机制。

1材料和方法

1.1tdds注射

将36只造模成功的MCAO大鼠随机分为SDF-1α治疗组、溶剂对照组和SDF-1α+CXCR4拮抗剂组,每组各12只。SDF-1α治疗组于MCAO术后1h起,通过5μL微量注射器连接至预先留置于右侧侧脑室内的TDDS注射内管,将生理盐水配制的重组大鼠SDF-1α(rmSDF-1α,RD公司,美国)溶液缓慢注射至右侧侧脑室,1μg/d,连续6d。注射完后留置10min,消毒后将套管帽装回。溶剂对照组通过侧脑室TDDS注射同一剂量和疗程的生理盐水。SDF-1α+CXCR4拮抗剂组则每天于SDF-1α注射前先皮下注射CXCR4拮抗剂AMD3100(RD公司,美国),1mg/d,连续6d。

1.25-溴脱氧尿醛类化合物

为标记新增殖的细胞,各组大鼠从处死前3d前起每隔12h经腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU,50mg/kg,SigmaAldrich公司,美国)。

1.3脑梗死体积的测定

1.4注释、加工和生产

1.5免疫荧光法的检测

1.6统计方法

2结果

2.1脑梗死肿瘤的位置

2.2脑梗死体积的测定

2.3sdf-1治疗能促进侧丘脑细胞的克隆

2.4sdf-1治疗组梗死侧丘脑各血管密度的比较,见表1

Laminin是血管的标记物,免疫荧光检测发现,在MCAO术后第7d和14d,与同时点溶剂对照组比较,SDF-1α治疗组梗死侧丘脑VPN内的血管密度增加(P0.05,见图2);而SDF-1α+CXCR4拮抗剂组与同时点SDF-1α治疗组相比,其梗死侧丘脑VPN内血管密度则减少(P0.05,见图2)。

2.5梗死侧丘脑brdu+/laminin+细胞数目变化情况

为了进一步证实外源性SDF-1α对脑梗死后远隔部位血管再生的促进作用,本研究采用BrdU与laminin免疫双标阳性来标记新增殖的血管内皮细胞。在MCAO术后第7d和14d,SDF-1α治疗组梗死侧丘脑VPN内BrdU+/laminin+细胞数目较同时点溶剂对照组(P0.05,见图3)增加;与同时点SDF-1α治疗组相比,SDF-1α+CXCR4拮抗剂组梗死侧丘脑VPN内BrdU+/laminin+细胞数则减少(P0.05,见图3)。从形态上看,存在BrdU+标记新增殖细胞的血管明显增宽变长,且血管壁变薄。

3sdf-1抗剂对脑梗死超早期生长的抑制效应

SDF-1是CXC趋化因子家族的一个成员,来源于骨髓基质细胞,分为SDF-1α和SDF-1β两个亚型。SDF-1通过与其特异性受体CXCR4结合介导细胞的增殖、迁移及骨髓造血干细胞的动员等多种生物学效应。近年来,作为一个促血管再生因子,SDF-1α在缺血性疾病中的治疗性血管再生作用备受关注。研究发现,下肢缺血、心肌梗死及脑梗死等缺血性疾病发生后,SDF-1α可内源性地表达上调,而外源性SDF-1α治疗能有效地促进局部缺血组织的血管再生,其机制可能与SDF-1/CXCR4信号通路调控骨髓来源的内皮祖细胞动员并归巢至局部缺血组织有关。

此外,除了专注于局部缺血脑组织的研究,国内外学者对脑梗死后继发性的远隔损伤也日益重视。越来越多的研究表明,脑梗死发生后,在远离梗死灶的部位(如梗死侧丘脑、黑质、脊髓等)存在继发性损伤和血管再生,这些对脑