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乳脂肪中sn-2脂肪酸组成和位置分布

母乳油提供45%的能量和必要的脂肪酸。虽然母乳母母脂肪是婴儿的最佳食品，但由于各种原因，仅以母乳母母不能满足婴儿的需求，因此有必要对其他母乳母油的生产进行系统研究。脂肪中甘油三酯的结构是会影响脂肪吸收的有效性,对配方食品喂养早产儿的临床研究,充分肯定了三酰甘油β位软脂酸可被更好地吸收。牛乳和婴儿配方乳中的棕榈酸主要分布在sn-1,3位置上,其被胰脂酶水解为游离脂肪酸,易与Ca2+形成钙皂,不能被人体很好地吸收利用。作为一种乳的替代物,许多研究都表明马奶营养特性优于牛奶,更适合做母乳替代物,马奶中不饱和脂肪酸和饱和脂肪酸的比例高于牛奶,有关马奶中脂肪酸的分布研究很少,本文研究马奶中甘油三脂结构的特异性,为马奶能否作为母乳替代物提供理论依据。

1材料和方法

1.1气相色谱仪和标准品

母乳、马奶采集于内蒙古锡林郭勒盟;胰脂肪酶、混合脂肪酸甲酯标准品37种购于Sigma公司;其他试剂均为分析纯。

AgilentGC7890A(FID)气相色谱仪美国安捷伦公司;氮吹仪北京康林科技有限责任公司。

1.2实验方法

1.2.1脂肪含量测定

1.2.2离心法

3mL的乳加入10mL的甲醇混合,再加入5mL氯仿和1.3mL的水(甲醇∶氯仿∶水=2∶1∶0.8)混合物,搅拌30min后加入5mL氯仿和5mL2%的无水硫酸钠溶液,最终混合物中甲醇、氯仿、水的比值为2∶2∶1.8,混合物继续搅拌15min后2250×g离心30min,下层通过含有2g无水硫酸钠的滤纸分离出去,其余的加入10mL氯仿再次离心,收集上层溶液,氮吹蒸发掉溶剂,收集脂肪。

1.2.3sn-2单甘油酯的合成2-氯-2-基苯磺酸酯盐系

取100mg样品放入10mL试管中,同时称取20mg胰脂肪酶,再于试管中加入0.2mL正己烷,摇匀,水浴40℃至溶解,加入称好的胰脂肪酶,并加入2mLTris-Base缓冲液(pH7.6),摇匀;加入0.5mL胆酸钠溶液(1g/L),0.2mL氯化钙溶液(220g/L),用塞将试管塞好,将试管置于40℃水浴5min;水浴后振荡器混匀2min后加入1mL盐酸溶液(6mol/L),1mL乙醚,振荡混匀10s,4000r/min离心4min,将乙醚层吸出,65℃氮吹将乙醚除去,约至200μL时停止;取乙醚层,将乙醚层用硅胶G薄层色谱法进行分离,展开剂体积比为70∶30∶1的正己烷、无水乙醚和甲酸,用0.1%的2,7-二氯荧光素在紫外灯下显色,刮取sn-2单甘油酯的条带。用乙醚提取,在氮气流下吹去乙醚,得到单甘脂。

1.2.4脂肪酸相对含量

为了更好更直观的比较各脂肪酸的相对含量,计算sn-2脂肪酸相对含量即:某种脂肪酸在sn-2上的含量占甘油三酯中总含量的百分比。公式如下:

1.2.5甲苯的碳酸钠标准溶液的制备

采用GB5413.27—2010中乙酰氯—甲醇甲酯化法,称取试样0.5g(精确到0.1mg)于15mL干燥螺口玻璃管中,加入5.0mL甲苯,加入10%乙酰氯甲醇溶液6.0mL,充氮气后旋紧螺旋盖,振荡混合后于(80±1)℃水浴中放置2h,期间每隔20min取出振摇一次,水浴后取出冷却至室温。将反应后的样液转移至50mL离心管中,分别用3.0mL碳酸钠溶液(6%)清洗玻璃管三次,合并碳酸钠溶液置于50mL离心管中,混匀,5000r/min分钟离心约5min。取上清液作为试液,气相色谱仪测定。

1.2.6色谱柱升温程序

色谱柱:PC-2560(100m×0.25mm×0.20μm);载气:氮气,载气流速:1.0mL/min;进样口温度:260℃;分流比:10∶1;检测器温度:260℃;色谱柱升温程序:100℃保持5min,以4℃/min升至200℃,保持5min,再以4℃/min升至240℃,保持25min;进样量:1.0μL。计算采用面积归一化法。

1.2.7统计分析

2结果与分析

2.1马奶和nd-奶的碳原子数

由表1可以看出,马奶的脂肪含量低于母乳,仅为母乳的1/3,但有研究表明马奶和母乳脂肪中甘油三脂遵循单峰模式,最多碳原子数在50~52,而牛奶则遵循双峰模式,最多碳原子数在34~40和42~54。营养学观点上看,甘油三脂结构影响酯酶的活性,进而影响脂肪吸收。

2.2亚麻酸和马奶中脂肪酸的比例

采用GB5413.27—2010中乙酰氯—甲醇甲酯化法对脂肪酸标样及母乳和马奶进行脂肪酸测定,对照脂肪酸标样,采用面积归一法,得出各脂肪酸百分含量。结果如表2所示。

表2数据表明母乳脂肪酸中亚油酸所占比例很高,马奶亚油酸比例低于母乳。根据Kin-sell等与Ahrens等的研究证实了亚油酸是一种降胆固醇的脂肪酸,并且亚油酸是人体必需脂肪酸,对中枢神经系统、视网