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培养肝细胞及神经元蛋白质含量测定方案的选择

双向电泳是蛋白质组研究的中心技术，测定蛋白质样品的制备和含量是双向电泳的基础。在双向电泳之前必须对蛋白质含量进行测定以确定蛋白质的上样量,如果测定结果不精确会对蛋白质电泳造成相当大的影响,这些影响主要有①测定结果偏大会出现蛋白质取量不足,电泳分离后低丰度蛋白质不能显现;②测定结果偏小会出现蛋白质取量过多,电泳图谱中斑点重叠,分辨率下降。因此,蛋白质含量测定是蛋白质组分析中一项基本而重要的环节。

由于不同组织、不同细胞中的蛋白质具有明显的差异性,它们对蛋白质含量测定方法也各有不同的要求。针对不同的组织细胞如何选择一种适合、简便、快速、灵敏的蛋白质含量测定方法就成为首先要解决的问题。目前蛋白质含量的测定方法有十几种,一般实验室中最常用的是Bradford法、Lowry法和Bio-radDC法。为了比较这几种方法在不同组织细胞蛋白样品测定中的优缺点,本研究对培养的成年小鼠肝、神经细胞的提取蛋白质,分别采用以上3种方法测定蛋白质含量并进行比较,最后采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdodecylsulphate-polyacryamidegelelectrophoresis,SDS)进一步验证测定结果,为不同的组织细胞选取适宜的蛋白质含量测定方法提供实验依据。

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