癌基因CPNE3正反馈YAP1通路促进胃癌化疗抵抗的机制研究.pdf

摘要

摘要

目的：

化疗抵抗是导致胃癌患者不良预后的重要因素，YAP1通过调控其下游基

因的表达，广泛参与调控包括化疗抵抗在内多种促癌进程，并在胃癌的发生发

展中发挥重要作用，然而其机制尚未完全阐明。有研究表明CPNE3在多种癌

症发生发展中密切相关，但在胃癌中的功能及机制仍不明确。本研究旨在筛选

YAP1下游潜在新靶基因，并通过体内及体外实验探究CPNE3在促胃癌生物学

功能及其机制。

方法：

1.使用mRNA测序技术对YAP1下游潜在靶基因进行筛选。2.通过RT-

qPCR、WesternBlotting及荧光素酶报告基因实验检验YAP1对CPNE3转录活

性的调控作用。3.通过CCK-8、Transwell侵袭迁移、克隆形成实验探究CPNE3

对胃癌细胞恶性生物学行为及化疗耐药的影响。4.通过Crisp-Cas9基因编辑技

术构建稳定敲除CPNE3的BGC-823细胞系，并进一步通过细胞系异种移植模

型（CDX）探究敲除CPNE3对胃癌肿瘤在体内生长的影响。

结果：

1.双荧光素酶报告实验显示YAP1和TEAD1-4能够协同激活CPNE3启动

子活性。2.实时荧光定量PCR和免疫印迹实验结果显示在胃癌细胞中下调

YAP1可抑制CPNE3mRNA和蛋白的表达，过表达YAP1则相反。3.免疫印迹

实验表明在胃癌细胞中敲低CPNE3抑制YAP1表达，过表达CPNE3则相反。4.

细胞功能实验结果表明CPNE3能够促进胃癌细胞侵袭迁移及化疗耐药。5.胃

癌CDX模型显示敲除CPNE3显著抑制了肿瘤的生长。

结论：

本研究发现并验证CPNE3是YAP1的下游调控靶基因，经YAP1诱导激活

后可进一步正反馈调控YAP1通路，促进胃癌细胞增殖，侵袭迁移及化疗耐

药。CPNE3可作为胃癌的治疗新的靶点。

关键词：YAP1；CPNE3；胃癌；标志物

II

Abstract

ABSTRACT

Objective:

Chemotherapyresistanceisanimportantfactorcontributingtothepoor

prognosisofgastriccancerpatients,andYAP1playsanimportantroleinthe

developmentofgastriccancerbyregulatingtheexpressionofitsdownstreamgenes,

whicharewidelyinvolvedinregulatingvariouscancer-promotingprocesses

includingchemotherapyresistance,however,itsmechanismhasnotbeenfully

elucidated.IthasbeenshownthatCPNE3iscloselyrelatedinthedevelopmentof

variouscancers,anditsfunctionandmechanismingastriccancerhavenotbeen

reportedintheliteraturesofar.Theaimofthisstu